Bio-Rad GAP IgA Helicobacter pylori Mode d'emploi

aussi commun chez les individus considérés en bonne
santé, sans symptômes cliniques de la maladie.
GAP IgG Helicobacter pylori
GAP IgA Helicobacter pylori
GAP IgM Helicobacter pylori
Numéro de catalogue GAP IgG
Numéro de catalogue GAP IgA
Numéro de catalogue GAP IgM
Principe du test
Les kits GAP IgG, IgA et IgM sont des dosages ELISA
quantitatifs pour le dépistage d'anticorps spécifiques de
H. pylori dans le sérum humain. Les sérums dilués des
patients sont déposés dans les puits de microtitration
recouverts d'antigènes de H. pylori partiellement purifiés.
Les anticorps du sérum, spécifiques de H. pylori,
réagiront avec les antigènes sur les puits. Les anticorps
non spécifiques sont éliminés par lavage. Un conjugué
enzymatique anti-IgG, IgA et IgM humain est ajouté et se
fixe au complexe antigène-anticorps. Le conjugué
enzymatique excédentaire est éliminé par lavage. Après
addition du substrat enzymatique, l'intensité de la
coloration est proportionnelle à la quantité d'anticorps
présent dans le sérum patient.
404 2002
404 3002
404 1002
96 tests par trousse
Mode d'emploi
Avant de vous servir du produit pour la première fois,
veuillez prendre connaissance du mode d'emploi.
Application
Ce test immunoenzymatique est utilisé pour le dépistage
quantitatif des anticorps IgG, IgA ou IgM spécifiques de
Helicobacter pylori. Ces réactifs doivent être utilisés
uniquement pour un diagnostic in vitro.
Composition du coffret
PLA H.pylori = Puits recouverts d'antigènes - 1 sachet
de 96 puits de microtitration recouverts d'antigènes de H.
pylori.
But du dosage
Helicobacter pylori a été retrouvée dans des échantillons
de biopsies d'épithélium gastrique démontrant une
gastrite type B active1,2,3,4,5. Bien que l'origine de
l'infection soit inconnue, des rapports démontrent que
l'infection à H. pylori est associée à la gastrite chronique.
6,7
Une corrélation a été démontrée entre la présence de
H. pylori et les lésions gastriques dans certains cas
d'ulcères du duodénum. 8 La guérison complète de la
gastrite après éradication de l'organisme a aussi été
rapportée. 9
CAL 0-4 = Etalons - 5 x 1 mL 0, 12.5, 25, 50 et 100
unités/mL d'anticorps anti-H. pylori dans du sérum humain
dilué.
CTRL + - = Contrôles - 1 x 1 mL Positif et 1 x 1 mL
Négatif en anticorps anti-H. pylori dans du sérum humain
dilué.
DIL SPE 25X = Diluant pour le sérum concentré - 1 x
20 mL de solution saline de phosphate avec du Tween.
H. pylori est un bâtonnet en spirale, recourbé et gram
négatif de 0.2 à 0.8 µm de large et 0.5 à 5 µm de long. Il
colonise la partie profonde de la couche de gel muqueux
et la surface apicale des cellules épithéliales de la
muqueuse gastrique. Il peut aussi se retrouver dans
l'interstice entre deux cellules épithéliales de la
muqueuse.
CONJ ENZ = Conjugué enzymatique - 1 x 10 mL
d'anticorps anti-IgG, IgA ou IgM humains conjugués à la
péroxydase de raifort, dans du tampon TRIS/BSA.
SUBS A TMB = Solution de substrat A - 1 x 8 mL de
TMB dans un tampon acétate de DMSO.
SUBS B H2O2 = Solution de substrat B - 1 x 8 mL de
peroxyde d'hydrogène dans un tampon acétate.
La présence de H. pylori peut être détectée par des
méthodes invasives ou non-invasives. Parmi les méthodes
invasives, l'analyse peut être réalisée à partir de biopsie,
culture, histologie ou test à l'uréase rapide. Les résultats
faussement négatifs sont courants parce que le H. pylori
est distribué de façon très inégale dans les tissus. Parmi
les méthodes non-invasives il y a aussi le dépistage
d'anticorps anti-H. pylori et le test à l'urée en cours
d'inspiration à l'aide d'urée radioactive.
Conserver à 2-8°C.
Le mécanisme d'infection par H. pylori n'est pas bien
compris. Il peut survivre dans la muqueuse gastrique,
possiblement pendant plusieurs années. H. pylori est
Les étalons, les contrôles et le diluant pour le sérum
contiennent 0.09% d'azoture de sodium comme agent de
conservation.
Mode d'emploi ELISA GAP IgG, IgM, IgA pour H. pylori
BUF WASH 50X = Tampon de lavage concentré (50x) 1 x 20 mL de solution saline de phosphate avec du Tween.
SOLN STOPPING = Solution blocante - 1 x 6 mL de
1 N H2SO4.
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La solution de lavage, le diluant pour échantillon et les
réactifs de la trousse sont stables 60 jours après le
premier usage si entreposé à 2-8°C.
Matériel complémentaire nécessaire
Lecteur de microplaques.
Laveur de microplaques.
Eprouvettes graduées: de 25, 50 et 100 µL.
Pipettes : de 5 et 10 mL.
Eprouvettes graduées : 500 et 1000 mL.
Tubes dilution échantillons (13x100 mm).
Film plastique.
Eau désionisée.
Prélèvement des échantillons
Les échantillons doivent être des échantillons de sérum.
Le sérum doit être séparé des cellules aussitôt que
possible après prélèvement. Ne pas utiliser d'échantillons
hémolysés ou hyperlipémiques. Les échantillons de
sérum peuvent être gardés au réfrigérateur (2-8°C)
jusqu'à 10 jours. Si les échantillons de sérum ne peuvent
être analysés dans cette période, ils doivent être
conservés à -20°C.
Précautions
Les composants d'origine humaine utilisés dans la
préparation de ce produit ont été testés selon des
méthodes approuvées par la FDA et trouvés non-réactifs
en antigènes de surface de l'hépatite B (HBsAg), en
anticorps anti-HIV-1/2 et en anticorps anti-HCV. Ces
composants n'ont pas été testés pour les anticorps antiHCV, HIV-2, HTLV I ou HTLV-II.
Du fait qu'aucune méthode ne peut garantir de façon
absolue l'absence d'agents infectieux, les composants de
ce produit doivent être considérés comme potentiellement
infectieux et manipulés avec les mêmes précautions
d'usage que les échantillons patients.
Dilution de l'échantillon de sérum
Chaque échantillon de sérum doit être dilué avec du
diluant pour échantillon. Ajouter 25 µL de chaque sérum
de patient à 5 mL de diluant pour échantillon. Mélanger
soigneusement. Les contrôles et les calibrateurs sont
fournis pré-dilués et prêts à l'emploi.
Dosage
1. Tous les réactifs et les échantillons doivent être
portés à température ambiante (18-25°C) avant
utilisation. Sélectionner le nombre de puits
nécessaire aux dosages.
Certains réactifs du kit contiennent de l'azoture de sodium
comme conservateur. L'azoture de sodium peut réagir
avec le plomb et le cuivre des canalisations pour former
des azides métalliques explosifs. Après évacuation de ces
produits dans les canalisations, faire couler de l'eau
abondamment afin d'éviter toute accumulation d'azoture.
2. Pipeter 100 µL d'étalons, d'échantillons de contrôles
et de patients dilués dans les puits correspondants.
Les contrôles et les calibrateurs sont pré-dilués et
prêts à l'emploi. Recouvrir la plaque avec un film
plastique et incuber pendant 60 minutes à 24 ± 2°C.
Le diméthyl sulfoxide et H2SO4 sont irritants pour la peau
et les yeux. Eviter le contact avec la peau et les yeux.
Porter des gants et des lunettes de protection. S'il y a
contact avec la peau ou les yeux, laver avec de l'eau au
moins 5 minutes.
3. Après incubation, jeter le contenu de tous les puits
dans l'évier. Laver les puits trois fois avec 300 µL de
tampon de lavage. Sécher soigneusement sur papier
absorbant avant de réaliser l'étape suivante.
Préparation des réactifs
Diluant pour échantillon de sérum :
Ajouter la totalité du contenu dans un récipient de 500
mL. Rincer le flacon à l'eau pour éliminer les cristaux.
Ajouter 480 mL d'eau désionisée. Mélanger
soigneusement.
4. Ajouter 100 µL de conjugué enzymatique dans tous
les micropuits. Recouvrir la plaque avec un film
plastique et incuber pendant 30 minutes à 24 ± 2°C.
5. La solution de substrat doit être préparée avant de
réaliser l'étape suivante. Voir le paragraphe
Préparation des réactifs pour plus d'information.
Tampon de lavage :
Ajouter la totalité du contenu dans un récipient de 1 L.
Rincer le flacon à l'eau pour éliminer les cristaux. Ajouter
980 mL d'eau désionisée. Mélanger soigneusement.
6. Après incubation, jeter le contenu de tous les puits
dans l'évier. Laver les puits trois fois avec 300 µL de
tampon de lavage. Sécher soigneusement sur papier
absorbant avant de réaliser l'étape suivante.
Solution de substrat :
Mélanger les solutions de substrat A et de substrat B
volume à volume. Préparer seulement la quantité
nécessaire. Pour 48 puits, ajouter 3 mL de la solution de
substrat A à 3 mL de la solution de substrat B. Mélanger
soigneusement. Employer cette solution dans l'heure qui
suit la reconstitution. Conserver dans le noir ou recouvert
d'un papier aluminium.
Mode d'emploi ELISA GAP IgG, IgM, IgA pour H. pylori
7. Ajouter 100 µL de la solution de substrat
nouvellement préparée dans tous les puits. Incuber la
plaque dans l'obscurité à 24 ± 2°C pendant 10
minutes.
8. Après exactement 10 minutes, ajouter le plus
rapidement possible 50 µL de la solution d'arrêt dans
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chacun des micropuits. Mélanger les réactifs en
tapotant la plaque.
Sensibilité et spécificité
Des essais cliniques du test GAP IgG, IgA et IgM ont été
réalisés dans quatre centres. Des patients présentant des
symptômes de gastrite ont été testés. Les échantillons de
biopsies de ces patients ont été analysés par culture,
coloration histologique et/ou test d'uréase. Les résultats
du GAP ont été comparés à ceux de l'étude histologique.
9. Lire les absorbances à 450 nm. La microplaque doit
être lue dans les 30 minutes suivant l'addition de la
solution d'arrêt. Utiliser un algorithme pour courbe
quadratique pour la courbe étalon et le calcul des
résultats.
Contrôle de la qualité
Sensibilité (%)
Spécificité (%)
Précision (%)
Nombre de Patients
Selon les bonnes pratiques de laboratoire, un contrôle
positif et un contrôle négatif doivent être dosés en
parallèle avec les sérums des patients. L'obtention de
résultats incorrects pour les contrôles peut indiquer une
erreur de manipulation, la détérioration des réactifs ou
une mauvaise manipulation des échantillons.
Négatif
Positif
Etalon zéro
GAP IgG
< 10 U/mL
25-50 U/mL
< 0,2 mOD
GAP IgA
< 10 U/mL
25-50 U/mL
< 0,2 mOD
GAP IgM
< 10 U/mL
40-70 U/mL
< 0,2 mOD
GAP IgA
> 20
12,5-20
< 12,5
GAP IgM
> 40
30-40
< 30
Positifs
Equivoques
Négatifs
GAP IgG valeurs attendues
Des essais cliniques du test GAP IgG H. pylori ont été
réalisés dans quatre centres différents. Un échantillon de
173 patients présentant des symptômes de gastrite a été
testé. Le tableau suivant présente le pourcentage de
patients, par diagnostic, ayant un résultant positif avec le
test GAP IgG.
GAP IgG
Moyenne
(U/mL)
11,4
21,2
45,9
Ecart-type
(U/mL)
0,8
2,3
3,6
Coefficient de
Variation (%)
7,1
11,2
7,9
GAP IgA
Moyenne
(U/mL)
6,9
26,5
48,3
Ecart-type
(U/mL)
0,4
1,1
2,6
Coefficient de
Variation (%)
6,3
4,3
5,4
GAP IgM
Moyenne
(U/mL)
10,2
25,2
44,4
Ecart-type
(U/mL)
0,5
1,4
2,5
Coefficient de
Variation (%)
4,9
5,7
5,7
Pourcentage
85 - 100 %
70 - 95 %
85 - 95 %
70 - 90 %
Mode d'emploi ELISA GAP IgG, IgM, IgA pour H. pylori
GAP IgM
93,8
82,0
89,3
109
La précision intra-série a été calculée sur 12 réplicats de
trois échantillons de sérum.
Un patient avec des résultats équivoques doit être retesté
2 semaines plus tard et le second échantillon doit être
testé simultanément avec le premier.
Diagnostic
Gastrite Chronique Atrophique
Gastrite Superficielle
Ulcère Duodénal
Ulcère à l'estomac
GAP IgA
92,2
82,5
88,5
109
Précision intra-série
Interprétation des résultats
GAP IgG
> 20
12,5-20
< 12,5
GAP IgG
99,4
93,5
97,5
277
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Précision inter-série
DISTR.
Bio-Rad Laboratories
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette
France
Tel. : +33 (0)1 47 95 60 00
Fax : +33 (0)1 47 41 91 33
La précision inter-série a été calculée en dosant trois
échantillons de sérum lors de 10 dosages distincts, avec
quatre opérateurs différents.
GAP IgG
Moyenne
(U/mL)
11,6
20,6
45,3
Ecart-type
(U/mL)
1,6
2,2
3,3
Coefficient de
Variation (%)
13,7
10,6
7,2
GAP IgA
Moyenne
(U/mL)
10,6
24,3
40,2
Ecart-type
(U/mL)
1,5
2,4
4,0
Coefficient de
Variation (%)
14,1
9,8
10,0
GAP IgM
Moyenne
(U/mL)
10,1
21,2
39,7
Ecart-type
(U/mL)
1,1
1,9
4,0
Coefficient de
Variation (%)
11,2
8,9
10,0
Contacts Bio-Rad:
United States 1-800-227-1600
Australia 61-2-9914-2800 Austria 43-1-877-8901
Belgium 32-9-385-5511
Canada 905-712-2771
France 33-1-4960-6834
Germany 49-89-31884-0
Netherlands 31-318-540666 Hong Kong 852-2-789-3300
Italy 39-2-216091
Japan 81-3-5811-6266
New Zealand 64-9-443-3099 Spain 34-1-661-7085
Sweden 46-8-627-5000
Switzerland 41-1-809-5555
United Kingdom 44-1-442-232552
SYMBOLES
Température de conservation
Code de fournée
Expiration
Limites de la méthode
Fabricant
Agent agréé
Les tests GAP IgG, IgA et IgM permet un dosage
quantitatif de la présence d'anticorps spécifiques au H.
pylori mais n'est pas indicatif du titre de l'anticorps.
Précaution, voir des instructions
Pour un diagnostic in vitro
Un résultat positif ne distingue pas colonisation et
infection par H. pylori et n'indique pas la présence de
maladie gastro-intestinale.
No de catalogue
DISTR.
Un résultat négatif n'exclut pas la présence d'anticorps
anti-H. pylori. La colonisation par H. pylori peut être
présente à un stade très précoce ou le titre de l'anticorps
peut être insuffisant pour être détecté par le test.
Distributeur
Biomerica, Inc.
1533 Monrovia Ave.
Newport Beach, California 92663 USA
Plusieurs équipes ont rapporté que des personnes âgées
de plus de 50 ans ont été atteintes très probablement
d'infection par H. pylori et peuvent montrer un taux très
bas mais détectable d'anticorps anti-H. pylori sans
montrer aucun symptôme clinique. 10,11,12 De plus,
l'incidence de la séropositivité peut varier en fonction de
la population.13
conformément à la directive 98/79/ de la CE sur les
dispositifs médicaux de diagnostic in vitro
MDSS
Burckhardtstrasse 1
30163 Hannover, Allemagne
Les tests GAP IgG, IgA ou IgM ne doivent être utilisés
que pour les patients ayant des signes et des symptômes
cliniques liés à une gastrite. Le test ne doit pas être utilisé
pour les patients asymptomatiques.
12/2003
Mode d'emploi ELISA GAP IgG, IgM, IgA pour H. pylori
Page 4
67004BR_fre DEC2003
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