NOTA :
Une liquéfaction partielle de l’agar entraînera inévitablement une altération significative de la
consistance du gel du milieu solidifié, après stérilisation et refroidissement.
MODE D’EMPLOI
Faire fondre le milieu (s’il est préparé à l’avance).
Refroidir et maintenir le milieu à 47°C.
Ajouter stérilement 1 mL de supplément sélectif reconstitué (BS037) par flacon.
Homogénéiser parfaitement.
Couler en boîtes de Petri stériles.
Laisser solidifier sur une surface froide.
Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert.
Ensemencer en stries l’inoculum à partir d’un bouillon d’enrichissement utilisé pour la recherche
des Escherichia coli O157:H7, à la surface des boîtes, afin d’obtenir des colonies isolées.
- Incuber à 37°C pendant 24 heures.
-
LECTURE
Après 24 heures d’incubation, Escherichia coli O157:H7 forme des colonies lisses, incolores, pouvant
présenter un halo orangé d’alcalinisation. La spécificité du milieu n’étant pas totale, les colonies
suspectes doivent être soumises à un test sérologique d’agglutination sur lame à l’aide d’antisérums
O157.
FORMULE - TYPE du milieu complet
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptone .........................................................................................17,0 g
- Peptone pepsique de viande ...........................................................3,0 g
- D-Sorbitol .......................................................................................10,0 g
- Sels biliaires n°3 ..............................................................................1,5 g
- Chlorure de sodium..........................................................................5,0 g
- Rouge neutre ..............................................................................30,0 mg
- Cristal violet ..................................................................................1,0 mg
- Céfixime ......................................................................................0,05 mg
- Tellurite de potassium ...................................................................2,5 mg
- Agar agar bactériologique ..............................................................13,5 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,1 ± 0,2.
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