MODE D’EMPLOI
Faire fondre le milieu (s’il est préparé à l’avance).
Refroidir et maintenir à 44-47°C.
Ajouter stérilement 1 mL de supplément CCCFA reconstitué (BS003) à 100 mL de milieu de base.
Homogénéiser parfaitement.
Couler en boîtes de Petri stériles.
Laisser solidifier sur une surface froide.
Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert.
Pour effectuer un dénombrement, transférer 0,1 mL de l’échantillon à analyser et de ses dilutions
décimales successives à la surface des boîtes ainsi préparées. Etaler l’inoculum en surface à
l’aide d’un étaleur stérile.
- Dans le cas d’une recherche, effectuer un isolement au moyen d’une anse bouclée, à partir d’un
bouillon d’enrichissement sélectif.
- Incuber à 37°C pendant 24 et 48 heures.
-
LECTURE
Après 24 heures d’incubation, Listeria monocytogenes forme des colonies vert-olive entourées d’un
halo noir. Après 48 heures, elles deviennent plus foncées avec un centre noir en creux et sont
entourées de zones noires. La gélose Oxford est un milieu très sélectif, cependant il est parfois
possible d’observer des colonies de staphylocoques ou d’entérocoques (qui cultivent légèrement en
donnant une faible coloration jaune ou noire, généralement après 30 à 40 heures d’incubation). Les
colonies suspectes seront soumises aux tests biochimiques d’identification.
FORMULE - TYPE du milieu complet
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Polypeptone ...................................................................................20,0 g
- Extrait autolytique de levure.............................................................3,0 g
- Amidon .............................................................................................1,0 g
- Chlorure de sodium..........................................................................5,0 g
- Esculine ...........................................................................................1,0 g
- Citrate ferrique ammoniacal .............................................................0,5 g
- Chlorure de lithium .........................................................................15,0 g
- Cycloheximide...........................................................................400,0 mg
- Colistine (sulfate) ........................................................................20,0 mg
- Céfotétan ......................................................................................2,0 mg
- Fosfomycine................................................................................10,0 mg
- Acriflavine .....................................................................................5,0 mg
- Agar agar bactériologique ..............................................................13,0 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,0 ± 0,2.
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