Prospect Astrovirus Mode d'emploi

ProSpecT Astrovirus FR
Dosage sur microplaque
R240196.............................
96
1. INTÉRÊT
Le test ProSpecTTM Astrovirus est un dosage immunoenzymatique
qualitatif avec amplification destiné à la détection de l’astrovirus
dans les fèces humaines.
2. RÉSUMÉ
Les astrovirus (famille des Astroviridae) sont des virus de petite
taille (28 nm), circulaires, à ARN simple brin (à polarité positive),
qui se caractérisent par un aspect distinct en forme d’étoile1,2. Huit
sérotypes humains au moins ont été identifiés à ce jour3.
Les astrovirus sont aujourd’hui reconnus comme étant
fréquemment à l’origine de gastro-entérites virales chez le jeune
enfant, dans le monde entier3,4. La période d’incubation dure
de 3 à 4 jours, et les symptômes se manifestent habituellement
pendant 2 à 3 jours, mais ils peuvent persister jusqu’à 12 jours
chez les personnes immunocompétentes, et sur une durée
significativement plus longue chez les patients immunodéprimés.
De récents rapports indiquent que l’incidence de l’infection à
astrovirus pourrait avoir été considérablement sous-estimée, en
raison des limites des méthodes diagnostiques disponibles. Ces
études laissent entendre qu’après les rotavirus, les astrovirus
pourraient représenter la seconde cause la plus fréquente de
gastro-entérites virales infantiles et le troisième pathogène le
plus fréquent, derrière l’espèce des salmonelles et les rotavirus
dans les diarrhées5,6,7. Les astrovirus ont été associés à des
épidémies de gastro-entérites dans des hôpitaux, des familles,
des communautés et des instituts pour adultes. Des épidémies
de grande envergure à médiation alimentaire ont également été
rapportées au Japon8,9.
Jusqu’à une époque récente, l’infection à astrovirus
était traditionnellement diagnostiquée par microscopie
électronique (ME). La ME repose sur une bonne préservation
de la morphologie de l’échantillon et sur les compétences de
l’opérateur. Néanmoins, étant donné que seulement 10 % des
particules d’astrovirus affichent la morphologie typique en
étoile, la détection peut souvent s’avérer difficile et conduire à
une erreur de diagnostic10,11. De plus, en raison de leur petite
taille, les astrovirus ne sont pas aussi faciles à observer que
les rotavirus, et ils peuvent être confondus avec d’autres petits
virus dont l’aspect structurel est circulaire. Par conséquent, le
fait de recourir uniquement à la morphologie identifiée par ME
en tant que critère diagnostique a entraîné une sous-estimation
de l’incidence de ces virus. Bien que des améliorations aient
été apportées aux techniques de culture12,13, il s’agit rarement
de la méthode de prédilection pour un diagnostic de routine, à
cause d’un manque de sensibilité. Parmi les récentes avancées
en matière de procédures diagnostiques figurent l’hybridation
dot-blot, la PCR et les dosages immunoenzymatiques11,14,15. La
disponibilité d’un antisérum spécifique dirigé contre des épitopes
spécifiques de groupe, de genre ou de type a conduit à la mise
au point d'immunodosages permettant la détection directe des
antigènes15. Il a été démontré que ces dosages affichent une
sensibilité accrue par rapport à la ME, et offrent une méthode de
dépistage plus économique, plus fiable et plus rapide7.
Récemment, une nouvelle génération d’immunodosages avec
amplification, intégrant une technologie d’amplification des
traceurs et des signaux, a démontré une sensibilité améliorée,
comparable à celle des méthodes d’amplification moléculaire16,17.
Le test ProSpecT Astrovirus est un dosage immunoenzymatique
qualitatif avec amplification destiné à la détection rapide des
astrovirus dans les échantillons de fèces humaines. Le test
utilise une association d'anticorps monoclonaux et polyclonaux
spécifiques du genre, ainsi qu'une amplification des traceurs,
pour détecter toutes les souches connues d’astrovirus humains
dans un immunodosage sur microplaque.
3. PRINCIPE DU TEST
employé pour détecter l’enzyme liée et provoque un changement
de couleur qui est arrêté par l’ajout d’acide. Une intensité de
couleur nettement supérieure aux niveaux d’arrière-plan indique
la présence de l’antigène d’astrovirus dans l’échantillon.
Représentation schématique du principe du dosage ProSpecT
Astrovirus
Couleur
Phase solide
Substrat
Couleur
Anticorps enduisant
la plaque
Virus
Sur la base de l'amplification
des traceurs
Substrat
Couleur
DÉFINITIONS DES SYMBOLES
Les symboles suivants sont utilisés dans l’ensemble des
informations relatives au produit.
Code et numéro de référence du produit
Consulter le mode d’emploi
N
Contenu suffisant pour « N » tests
Fabriqué par
Dispositif médical de diagnostic in vitro
Utiliser avant
Code de lot
Limites de température de stockage
Le dosage sur microplaque ProSpecT Astrovirus utilise un anticorps
polyclonal et un conjugué polymère dextrane, avec une forte
incorporation de molécules enzymatiques et d’anticorps, dans
un immunodosage sur phase solide, afin de détecter l’antigène
d’astrovirus. Les micropuits sécables sont enduits de l’anticorps
polyclonal anti-astrovirus spécifique du genre. La suspension
fécale est ajoutée au micropuits et l’antigène d’astrovirus présent
dans l’échantillon se lie à la phase solide. L’anticorps monoclonal
spécifique du genre conjugué à la dextrane se lie à l’antigène
d’astrovirus capturé sur la phase solide, liant ainsi le complexe
conjugué polymère qui incorpore les multiples molécules
enzymatiques (amplification des traceurs). Un chromogène est
Substrat
4. Molécule de polymère
HRP (peroxydase de raifort)
Anticorps conjugué
Contrôle positif (4 ml) : astrovirus inactivé
de type 1 (protéine recombinante non
infectieuse) dans une solution tamponnée
contenant un agent antimicrobien.
Contrôle négatif (4 ml) : solution saline
avec tampon tris contenant un agent
antimicrobien et une teinture rouge.
Conjugué polymère (12 ml) : anticorps
monoclonal anti-astrovirus spécifique du
genre conjugué à une structure polymère
dextrane liée à de multiples molécules
de peroxydase de raifort (HRP), dans une
solution protéique tamponnée contenant
un agent antimicrobien et une teinture
bleue.
Tampon de lavage concentré (120 ml)
(10x) : solution tamponnée au phosphate
contenant un agent antimicrobien et un
détergent.
5. CONTENU DE LA TROUSSE
96 - Chaque trousse contient suffisamment de produits
pour 96 déterminations.
- La durée de conservation de la
trousse est indiquée sur l'étiquette apposée sur l'emballage.
Conserver tous les composants entre 2 et 8 °C.
Avant utilisation, laisser tous les réactifs atteindre la température
ambiante (20 à 25 °C) et mélanger délicatement. Après usage,
stocker tous les réactifs non utilisés entre 2 et 8 °C.
Tous les réactifs, à l’exception du tampon de lavage, sont fournis
prêts à l’emploi. Si le réactif est versé pour être utilisé avec des
pipettes multicanaux, ne pas réintroduire le réactif en excès dans
le flacon.
Diluer le tampon de lavage concentré 10x
en ajoutant 1 volume de concentré à 9
volumes d’eau distillée ou déminéralisée.
Le tampon de lavage dilué reste stable sur
une durée allant jusqu’à 30 jours lorsqu’il
est conservé entre 2 et 8 °C.
Substrat (12 ml) :
3,3’-5,5’-tétraméthylbenzidine dans
un tampon légèrement acide.
Solution d’arrêt (12 ml) : acide sulfurique
à 0,46 mol/l.
6. PRÉCAUTIONS
- Pour utilisation diagnostique in vitro. Toute personne
procédant à un dosage avec ce produit doit être formée à son
Mode d'emploi
utilisation et avoir l’expérience des procédures de laboratoire.
Pipettes de transfert
Se référer à la fiche de données de sécurité du matériel (MSDS)
Couvercle de microplaque
et à l’étiquetage des produits pour prendre connaissance
Certificat de contenu
des informations relatives aux composants potentiellement
Fiche de procédure
dangereux.
Une plaque de microtitration de 96 puits,
composée de douze barrettes sécables
de 8 micropuits enduits d’un anticorps
polyclonal de lapin spécifique des
astrovirus.
CONSIGNES DE SANTÉ ET DE SÉCURITÉ
6.1. Le contrôle positif contient une protéine recombinante
d’astrovirus de type 1 qui, pour sa manipulation et sa
mise au rebut, doit être traitée comme potentiellement
infectieuse.
Un sachet métallisé refermable contenant
un dessiccatif est fourni pour la
conservation des micropuits non utilisés.
Les micropuits peuvent être utilisés jusqu’à
16 semaines après l’ouverture initiale,
sous réserve qu’ils aient été conservés
correctement dans le sachet.
6.2. L a solution d’arrêt contient de l’acide sulfurique (0,46
mol/l).
Un flacon de chacun des composants suivants :
Diluant pour échantillon (120 ml) : solution
saline avec tampon tris contenant un agent
antimicrobien et une teinture rouge.
6.3. L e tampon de lavage contient une substance qui peut
s’avérer sensibilisante au niveau cutané (<1 % v/v). Éviter
tout contact avec la peau. Porter des gants jetables en vinyle
ou en nitrile.
6.4. N
e pas manger, boire, fumer, stocker ou préparer des
aliments ni appliquer des cosmétiques dans la zone de
travail désignée.
6.5. N
e pas prélever de produits dans une pipette par aspiration
buccale.
6.6. P
orter des gants jetables pour manipuler les échantillons
cliniques et les réactifs. Toujours se laver les mains après
avoir travaillé sur des produits infectieux.
7. PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS FÉCAUX
Les échantillons fécaux doivent être prélevés dès que possible
après l'apparition des symptômes.
6.7. Mettre au rebut tous les échantillons
conformément à la législation en vigueur.
Les échantillons fécaux destinés à des tests directs doivent
être prélevés dans des cuvettes exemptes de tout milieu,
conservateur, sérum animal, ions métalliques, agents oxydants
ou détergents, car tous ces additifs pourraient perturber le test
ProSpecT Astrovirus.
cliniques
6.8. L es réactifs ProSpecT Astrovirus contiennent un agent
antimicrobien propriétaire qui ne présente aucun risque
pour l’utilisateur si les précautions de sécurité normales en
laboratoire sont observées.
PRÉCAUTIONS ANALYTIQUES
6.9. Les composants ne doivent pas être utilisés après la date de
péremption imprimée sur les étiquettes. Ne pas mélanger ou
intervertir les réactifs suivants, sous peine de compromettre
les performances : plaque, conjugué et contrôles.
6.10.Les réactifs communs suivants peuvent être utilisés pour
toute la gamme de produits ProSpecT : tampon de lavage,
substrat TMB et solution d’arrêt.
6.11.Éviter la contamination des réactifs.
6.12.En cas d’application d’une méthode par flacon comptegouttes, s’assurer que tous les contrôles et réactifs sont
ajoutés de la même façon. (L’application combinée des
méthodes par pipettes et par compte-gouttes pourrait nuire
aux performances de la trousse.)
6.13.Utiliser des pipettes jetables ou des pointes de pipettes
différentes pour chaque échantillon, contrôle ou réactif (si
ce ne sont pas des flacons compte-gouttes qui sont utilisés),
afin d’éviter la contamination croisée des échantillons,
des contrôles ou des réactifs qui pourrait conduire à des
résultats erronés.
6.14.Stocker l’eau déminéralisée ou distillée destinée à la dilution
du réactif concentré dans des récipients propres, afin
d’éviter une contamination microbienne.
En cas de prélèvement avec des écouvillons rectaux, ceux-ci
doivent contenir suffisamment de matières fécales pour obtenir
une suspension à 10 % de fèces (voir la section 8).
Les échantillons peuvent être conservés pendant 8 jours entre
2 et 8 °C avant le test. Pour une conservation à long terme, les
échantillons fécaux doivent être stockés à -20 °C.
8. PROCÉDURE
MATÉRIEL NÉCESSAIRE FOURNI
Voir le contenu de la trousse, à la section 5
MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI
Conteneurs pour prélèvement d’échantillons fécaux
Conteneurs jetables propres à bouchon à vis (d’une capacité
minimale de 3 ml) pour la préparation des échantillons fécaux.
Papier absorbant propre (sur lequel les micropuits pourront être
séchés).
Micropipettes de précision et pointes jetables permettant la
distribution de volumes de 50, 100 et 1000 µl.
Conteneur de mise au rebut avec désinfectant frais adéquat.
Minuteur
Flacon de lavage pour le tampon de lavage
Eau distillée ou déminéralisée
6.15.Éviter la contamination par les ions métalliques et les agents
oxydants.
MATÉRIEL FACULTATIF NON FOURNI
Lecteur de microplaque capable d’effectuer des lectures à 450 nm
(avec une référence facultative à 620-650 nm).
6.16.Ne pas utiliser de substrat présentant une couleur bleue
avant son ajout dans les micropuits.
Agitateur vortex avec adaptateur de plaques ou incubateur
agitateur de plaques.
6.17.Protéger le conjugué et le substrat de la lumière.
Laveur de plaques automatisé ou appareil adéquat pour le lavage
de 8 barrettes de micropuits.
6.18.Les micropuits ne sont pas réutilisables.
6.19.Le tampon de lavage de force réactive non utilisé peut être
conservé jusqu’à 30 jours entre 2 et 8 °C pour une utilisation
ultérieure. Lorsqu’ils ne sont pas utilisés, les réservoirs de
tampon de lavage doivent être rincés à l’eau déminéralisée
ou distillée et sécher à l’air.
6.20.L’équipement de lavage manuel ou automatisé doit être
exempt de toute contamination microbienne, correctement
étalonné et entretenu conformément aux instructions du
fabricant.
6.21.Lors de l’utilisation de flacons de réactif compte-gouttes,
tenir les flacons verticalement, la buse se trouvant à 5
mm environ au-dessus du micropuits. Serrer doucement
le flacon et s’assurer que les gouttes tombent directement
dans les micropuits, sans en toucher les côtés. Éviter la
contamination de toutes les buses compte-gouttes.
PROCÉDURE
8.1. Ouvrir le sachet métallisé, retirer le nombre nécessaire de
barrettes de microplaque et les placer dans un support de
barrettes de microplaque. Utiliser un puits pour le contrôle
négatif et un puits pour le contrôle positif. Si moins de 8
puits doivent être utilisés, détacher d’une barrette le
nombre nécessaire de puits et remettre les puits non
utilisés dans le sachet métallisé contenant le dessiccatif.
REFERMER HERMÉTIQUEMENT LE SACHET AFIN D’ÉVITER
L’INTRODUCTION D’HUMIDITÉ, ET REMETTRE EN STOCKAGE
ENTRE 2 et 8 °C.
DILUTION D’ÉCHANTILLONS FÉCAUX
Verser 1 ml de diluant pour échantillon dans un conteneur
adéquat étiqueté et l'utiliser pour préparer une suspension ou
une dilution à 10 % de l’échantillon fécal en ajoutant 0,1 g environ
de fèces solides (un morceau de la taille d’un petit pois) ou 100
µl environ de fèces liquides au moyen de pipettes de transfert.
Mélanger soigneusement et laisser la pipette de transfert dans le
conteneur pour l’utiliser ultérieurement.
9. CONTRÔLE DE QUALITÉ
Les contrôles positif et négatif doivent être inclus lors de chaque
réalisation du test.
Faire tourner les écouvillons rectaux dans 1 ml de diluant
pour échantillon, tout en pressant l’échantillon contre la paroi
du conteneur pour libérer les matières fécales. Mélanger
soigneusement.
DÉTERMINATION VISUELLE
Tous les micropuits de contrôle négatif doivent être incolores.
Si tel n’est pas le cas, les résultats du test ne doivent pas être
déterminés visuellement.
Les suspensions fécales préalablement fixées dans du formol
doivent être à nouveau diluées dans du diluant pour échantillon
ProSpecT Astrovirus, afin de préparer une suspension à 10 % de
fèces avant le test.
Le micropuits de contrôle positif doit présenter une couleur bleue
distincte et facile à distinguer du contrôle négatif.
Les échantillons en suspension/dilution dans le diluant pour
échantillon ProSpecT Astrovirus peuvent être conservés entre 2
et 8 °C pendant une durée maximale de 8 jours avant le test.
REMARQUE : Les échantillons fécaux préparés dans du diluant
pour échantillon ProSpecT Adenovirus, ProSpecT Rotavirus ou
ProSpecT Norovirus peuvent également être testés au moyen
du test ProSpecT Astrovirus. L’utilisation d’autres diluants pour
échantillon n’a pas été validée.
8.2. A
jouter 2 gouttes (ou 100 µl) de chaque échantillon dilué,
de contrôle négatif ou de contrôle positif aux différents
micropuits. Un contrôle négatif et un contrôle positif au
moins doivent être inclus dans chaque lot de tests.
8.3. A
près l’ajout de tous les échantillons et contrôles, utiliser
une micropipette pour ajouter 100 µl de conjugué dans
chacun des micropuits et mélanger délicatement pendant
20 à 30 secondes
DÉTERMINATION PAR SPECTROPHOTOMÉTRIE
La valeur du contrôle négatif, ou la moyenne des valeurs de
contrôle négatif, doit être inférieure à 0,150 unités d’absorbance.
La valeur du contrôle positif doit être supérieure à 0,500 unités
d’absorbance.
10. RÉSULTATS
DÉTERMINATION VISUELLE
Tout échantillon donnant une couleur bleue plus intense que
celle du contrôle négatif est positif. Tout échantillon donnant une
couleur équivalente à celle du contrôle négatif, ou moins intense
que celle-ci, est négatif. Les micropuits pour lesquels l’intensité de
couleur est difficile à interpréter par rapport au contrôle négatif
doivent être lus par photométrie après ajout de la solution
d’arrêt, ou testés à nouveau.
DÉTERMINATION PAR SPECTROPHOTOMÉTRIE
10.1.Les micropuits doivent être lus par photométrie dans les 30
minutes suivant l'ajout de la solution d'arrêt.
8.4. Couvrir la plaque et incuber entre 20 et 30 °C pendant 60
+/- 5 minutes
8.5. A
spirer ou déverser le contenu des puits. Procéder au
lavage en remplissant complètement chaque puits avec du
tampon de lavage dilué (~350 à 400 µl par puits). Déverser
tout le liquide des puits ou l’aspirer après chaque lavage.
Procéder au lavage 5 fois au total. Après le dernier lavage,
retirer le contenu et retourner la plaque sur des serviettes
en papier propres ou aspirer. En cas d’utilisation d’un laveur
automatique, celui-ci doit être programmé pour effectuer
5 cycles de lavage. Les laveurs doivent être correctement
étalonnés afin de garantir que le remplissage et la vidange
des micropuits sont complets entre chaque lavage. Après
le lavage final, la plaque doit être renversée et tapotée sur
du papier absorbant pour retirer les dernières traces de
tampon de lavage.
10.2.Mélanger le contenu des micropuits et lire l’absorbance de
chaque micropuits à l’aide d’un spectrophotomètre réglé
sur 450 nm. Veiller à ce que le fond des micropuits soit
propre avant de procéder à la lecture. Le lecteur doit être
soumis à un blanc sur l’air avant que la plaque ne soit lue.
10.3.Si le spectrophotomètre permet le recours à une longueur
d’ondes de référence (à 620 ou 650 nm), une lecture en
double longueur d’ondes doit être effectuée.
10.4.Calculer la valeur de seuil en ajoutant 0,100 unités
d’absorbance à la valeur de contrôle négatif, ou à la valeur
moyenne lorsque plusieurs contrôles négatifs sont utilisés.
10.5.Interprétation des résultats du test :
ositif : la valeur d’absorbance de l’échantillon clinique est > à
P
la valeur seuil.
8.6. A
jouter 2 gouttes (ou 100 µl) de substrat dans chaque
micropuits.
égatif : la valeur d’absorbance de l’échantillon clinique est < à
N
la valeur seuil.
8.7. Couvrir la plaque et incuber entre 20 et 30 °C pendant 10
minutes.
É quivoque : la valeur d’absorbance de l’échantillon clinique se
situe à moins de 0,010 unités d’absorbance de la valeur seuil. Ces
échantillons doivent être à nouveau testés ou bien le patient doit être soumis à de nouveaux prélèvements.
8.8. L es micropuits peuvent être lus visuellement immédiatement
après la deuxième incubation (voir les sections 9 et 10).
8.9. Il est également possible d’arrêter la réaction du substrat
en ajoutant 2 gouttes (ou 100 µl) de solution d’arrêt dans
chaque micropuits. Veiller à bien mélanger les micropuits
avant de lire les résultats. Le produit coloré est stable
pendant 30 minutes au maximum après l’ajout de la solution
d’arrêt.
8.10. Lire par spectrophotométrie à 450 nm (voir les sections 9 et 10).
11. LIMITES DE PERFORMANCE
11.1.La validité des résultats obtenus avec le dosage sur
microplaque ProSpecT Astrovirus dépend du fait que les
réactions des contrôles se déroulent comme prévu. Voir le
contrôle de la qualité à la section 9.
11.2.Un résultat négatif n'exclut pas la possibilité d'une infection
à astrovirus chez le patient. La non-détection de l’astrovirus
peut être due à des facteurs tels que le prélèvement de
l’échantillon à un moment inadéquat de la maladie, alors
que trop peu de virions étaient présents, un prélèvement
inadéquat, une manipulation incorrecte de l'échantillon.
11.3.Le test ProSpecT Astrovirus détecte des protéines virales
spécifiques du genre présentes dans les sérotypes humains
d’astrovirus. Le test ne peut pas servir à différencier
les sérotypes d'astrovirus, ou à détecter des sérotypes
d'astrovirus non humains.
11.4.Les réactifs sont fournis à des concentrations de
fonctionnement fixes. La performance du test sera affectée
négativement si les réactifs sont modifiés ou conservés
dans des conditions autres que celles qui sont détaillées à
la section 5.
94 patients consultant pour une gastro-entérite (51 de sexe
féminin, 42 de sexe masculin, 1 de sexe inconnu, tranches d'âges
de 0,1 à 88,4 ans). L'étude avait pour objectif de comparer les
performances du test ProSpecT Astrovirus par rapport au test
déjà validé IDEIA™ Astrovirus. La microscopie électronique a été
employée pour confirmer le statut des échantillons positifs.
Les résultats de l’étude sont donnés dans le tableau 13.1.
PERFORMANCE CLINIQUE
Le test ProSpecT Astrovirus a montré une sensibilité de 100 % et
une spécificité de 98,3 %.
Tableau 13.1 Sensibilité et spécificité comparées de ProSpecT
Astrovirus et IDEIA Astrovirus
11.5.L’utilisation du dosage sur microplaque ProSpecT Astrovirus
pour le test direct d’échantillons autres que fécaux est
déconseillée, dans la mesure où une présence d’antigènes
insuffisante ou un prélèvement inapproprié des échantillons
pourraient engendrer des résultats négatifs trompeurs. Un
résultat positif du test des échantillons fécaux, associé à
l’existence de diarrhées, est hautement évocateur d’une
gastro-entérite à astrovirus.
11.6.Un résultat positif n’exclut pas la présence d’autres
pathogènes entériques. Même si la relation entre les
astrovirus et la gastro-entérite est bien établie3,4, une
infection concomitante par d’autres pathogènes microbiens
est possible.
11.7.L’utilisation d’échantillons de méconium pour le dosage sur
microplaque ProSpecT Astrovirus n’a pas été validée.
11.8.Les résultats du test doivent être interprétés conjointement
avec les informations obtenues grâce aux études
épidémiologiques, l'évaluation clinique du patient et
d'autres procédures de diagnostic.
12. VALEURS ATTENDUES
Les taux de positivité peuvent varier en fonction de la prévalence
des astrovirus dans différentes populations, du lieu géographique,
du prélèvement des échantillons, de la manipulation, de la
conservation et du transport des échantillons, du système de
culture cellulaire employé et de l’environnement sanitaire général
de la population de patients faisant l’objet de l’étude.
Les astrovirus se manifestent dans le monde entier, avec
une recrudescence en hiver et au printemps dans les zones
tempérées18,19. Les nourrissons de moins de 12 mois sont
fréquemment touchés et, à l'âge de 5 ans, plus de 80 % des enfants
montrent des preuves sérologiques d'infection antérieure20.
Parmi les huit sérotypes humains, le type 1 est de loin le plus
prévalent (> 60 %) au Royaume-Uni, et certains signes indiquent
que sa fréquence augmente une année sur deux21. Il est fréquent
d’observer des doubles infections par d'autres pathogènes
entériques, en particulier des rotavirus22.
13. CARACTÉRISTIQUES
EN
MATIÈRE
DE
PERFORMANCES
ÉTUDES CLINIQUES
Le test ProSpecT Astrovirus a été évalué de façon indépendante
dans une étude clinique menée dans un centre de référence au
Royaume-Uni.
L’étude a été conduite sur des échantillons fécaux prélevés sur
ProSpecT
Astrovirus
Sensibilité
+
-
+
35
1a
-
0
58
98,3% (58/59)
Spécificité
a
IDEIA Astrovirus
100 % (35/35)
Positivité de l’échantillon confirmée par microscopie électronique
PRÉCISION
Précision intra-dosage
La précision intra-dosage a été évaluée en utilisant trois
échantillons fécaux représentatifs d’échantillons de positivité
faible, moyenne et haute. Chaque préparation de contrôle a été
testée 24 fois dans huit dosages effectués par deux opérateurs.
L’absorbance moyenne et le coefficient de variation moyen pour
la précision intra-dosage ont été déterminés.
Tableau 13.2 Précision intra-dosage moyenne du test ProSpecT
Astrovirus
Échantillon
AB moyenne
Faible
0,454
CV moyen en %
Moyenne
0,973
4,4
Haute
1,568
4,2
5,3
microbien avait été déterminé ou sur des cultures de laboratoire
d'organismes connus, contenant 107-108 organismes viables/ml
environ. La source des micro-organismes est référencée dans la
légende ci-dessous :
J. Med. Virol., 24: 211-218
7.Putzker, M., Sauer, H., Kirchner, G. and Malic, A. (2000)
Virus
Adénovirusa
n electron microscopical investigation of faecal small round
A
viruses.
Calicivirusa
Rotavirusa
Bactéries
Acinetobacter sp
Listeria monocytogenes
Aeromonas hydrophila Neisseria gonorrhoea
Bacteroides fragilis
Peptococcus sp
Campylobacter coli
Peptostreptococcus sp
Citrobacter freundii Proteus sp
Clostridium difficilea Pseudomonas aeruginosa
Clostridium perfringensSalmonella typhimurium
Enterobacter cloacae Serratia marcescens
Enterococcus faecalis Shigella sonnei
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Gardnerella vaginalis Staphylococcus epidermidis
Haemophilus influenzae Streptocoque B-hémolytique du groupe A
Klebsiella sp
Veillonella sp
Lactobacillus sp
Autres micro-organismes
Candida albicans
Légende :
Community acquired diarrhea – the incidence of astrovirus
infections in Germany.
Clin. Lab., 46: 269-273
8.Utagawa, E.T., Nishizawa, S., Sekine, S., Hayashi, Y., Ishihara, Y.,
Oishi, I., Iwasaki, A., Yamashita, I., Miyamura, K., Yamazaki, S.,
Inouye, S., Glass, R.I.(1994)
Astrovirus as a Cause of Gastroenteritis in Japan.
Journal of Clinical Microbiology, 1841-1845
9. O
ishi, I., Yamazaki, K., Kimoto, T., Minekawa, Y., Utagawa, E.,
Yamazaki, S., Inouye, S., Grohmann, G.S., Monroe, S.S., Stine,
S.E., Carcamo, C., Ando, T.,Glass, R.I. (1994)
large Outbreak of Acute Gastroenteritis Associated with
A
Astrovirus among Students and Teachers in Osaka, Japan.
Journal of Infectious Diseases, 170: 439-443
10.Willcocks, M.M., Carter, M.J. and Madeley, C.R. (1992)
Astroviruses
Reviews. Med. Virol., 2: 97-106
Micro-organismes présents et testés dans les fèces
11. W
illcocks, M.M., Carter, M.J., Silcock, J.G., and Madeley, C.R.
(1991)
Tous les autres micro-organismes ont été cultivés et testés dans
A dot-blot hybridisation procedure for the detection of astrovirus
un bouillon de culture.
in stool samples.
14. BIBLIOGRAPHIE
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Epidemiol. Infect., 107: 405-410
Viruses associated with Acute Diarrhoeal Disease.
In Principles and Practices of Clinical Virology.
S erial Propagation of astrovirus in Tissue Culture with the Aid of
Trypsin.
(eds A.J. Zuckerman et al). John Wiley and Sons Ltd., 188-189.
J. Gen. Virol., 57: 421-424
2.Carter, M.J. (1994)
13.Willcocks, M.M., Carter, M.J., Laidler, F.R., and Madeley, C.R.
(1990)
a
enomic organisation and expression of astroviruses and
G
caliciviruses.
12.Lee, T.W. and Kurtz, J.B. (1981)
rowth and characterisation of human faecal astrovirus in a
G
continuous cell line.
Précision inter-dosages
Arch. Virol., (Suppl.) 9: 429-439
La précision inter-dosages a été évaluée en utilisant trois
échantillons fécaux. Chaque dilution a été testée dans huit dosages
effectués par deux opérateurs, et les valeurs d'absorbance
moyennes ainsi que le coefficient de variation ont été déterminés.
3. Walter, J.E. and Mitchell, DK (2000)
Current Opinion in Pediatrics, 12: 275-279
etection of human astrovirus serotype 1 by the polymerase
D
chain reaction.
Tableau 13.3 Précision inter-dosages du test ProSpecT Astrovirus
4.Lew, J.F., Glass, R.I., Petric, M. et al (1990)
J. Virol. Methods., 44: 83-88
CV moyen en %
S ix year retrospective surveillance of gastroenteritis viruses
identified at ten electron
15.Herrman, J.E., Nowak, N.A., Perron-Henry, D.M., Hudson,
R.W., Cubitt, W.D., and Blacklow, N.R. (1990)
Role of Astrovirus in childhood diarrhea.
Arch. Virol., 113: 73-81
14.Jonassen, T.O., Kjeldsberg, E. and Grinde, B. (1993)
Échantillon
AB moyenne
Faible
0,454
5,7
microscopy centres in the United States and Canada.
Moyenne
0,973
5,1
Ped. Infect. Dis. J., 9: 709-714
iagnosis of Astrovirus Gastroenteritis by Antigen Detection with
D
Monoclonal Antibodies.
Haute
1,568
3,7
5. Herrmann, J.E., Taylor, D.N., Echeverria P. et al (1991)
J. Infect. Dis., 161: 226-229
Astroviruses as a cause of gastroenteritis in children.
16.Tanaka, M., Nakayama, H., Sagiyama, K., Haraoka, M.,
Yoshida, H., Hagiwara, T., Akazawa, K., Naito, S. (2000)
RÉACTIVITÉ CROISÉE
Les micro-organismes suivants ont été testés et avérés négatifs
dans le test ProSpecT Astrovirus. Des tests de réactivité croisée
ont été effectués sur des échantillons cliniques dont le statut
N. Engl. J. Med., 324: 1757-1760
6. Oliver, A.R. and Phillips, A.D. (1988)
E valuation of a new amplified enzyme immunoassay (EIA) for
the detection of Chlamydia trachomatis in male urine, female
endocervical swab and patient obtained vaginal swab specimens
J. Clin. Path., 5: 350-354
17.Chernesky, M., Jand, D., Copes, D., Patel, J., Petrich, A., Biers,
K., Sproston, A., Kapala, J. (2001)
omparison of a polymer conjugate-enhanced enzyme
C
immunoassay to ligase chain reaction for diagnosis of Chlamydia
trachomatis in endocervical swabs
J. Clin. Micro., 2306-2307
18.Kurtz. J.B., and Lee, T.W. (1987)
Novel diarrhoea viruses: Astroviruses: human and animal.
Willey, Chichester (Ciba Foundation Symposium 128), 92-107
19.Moe, C.L., Allen, J.R., Monroe, S.S. et al (1991)
etection of Astrovirus in Paediatric Stool samples by
D
Immunoassay and RNA probe.
J. Clin. Micro., 29: 2390-2395
20.Kurtz, J.B. and Lee, T.W. (1978)
Astrovirus gastroenteritis. Age distribution of antibody.
Med Microbiol. Immunol., 166: 227-230
21.Lee, T. W. and Kurtz, J. B. (1994)
revalence of human astrovirus serotypes in the Oxford region
P
1976 – 92, with evidence for two new serotypes.
Epidemiol. Infect., 112: 187-193
22.Nazer, H., Rice, S., Walker-Smith, J.A. (1982)
Clinical associations of stool Astrovirus in childhood.
J. Pediatr Gastroenterol. Nutr., 1: 555-5
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