1 Utilisation
Le test Access HIV combo utilise une technique immuno-enzymatique chimioluminescente à particules paramagnétiques pour la détection qualitative de l’antigène p24 du VIH-1 et des anticorps anti-VIH-1
(groupes M et O) et anti-VIH-2 dans le sérum et le plasma humains
, à l’aide des Systèmes d’immunoanalyse Access.
Le test Access HIV combo est utilisé comme aide au diagnostic d’une infection par le
VIH-1 ou VIH-
2. Ce test ne permet pas de distinguer la réactivité due à l’antigène p24 du VIH-1 de celle due aux anticorps anti-VIH-1 ou anti-VIH-2.
2 Résumé et explication du test
Le syndrome d’immunodéficience acquise (SIDA) est une maladie infectieuse d’origine virale se traduisant par un déficit profond de l’immunité cellulaire.
Deux types de virus apparentés au groupe de lentivirus ont été isolés des lymphocytes de patients atteints de SIDA ou de ses prodromes
(1,2,3)
.
Le premier, nommé VIH-
1 (Virus de l’Immunodéficience Humaine) ou HIV-1 (Human Immunodeficiency
Virus), a été isolé en France puis aux USA. Le second, nommé VIH-2 ou HIV-2, a été identifié chez deux malades d’origine africaine et s’est révélé être responsable d’un nouveau foyer de SIDA en Afrique de l’Ouest
(3,4,5,6)
.
Les connaissances sur la variabilité génétique des souches des VIH ont été acquises par le séquençage des gènes GAG, POL et ENV des souches représentatives de chacun des sous-types
(7)
.
Une étude phylogénétique a permis de distinguer plusieurs groupes de VIH-1 : le groupe M (« Major » : principal), le groupe N (non-M et non-O), le groupe O (« Outlier » : hors catégorie) et le groupe
P
(8,9,10,11,12,13)
.
Le VIH-1 du groupe M comprend 9 sous-types différents (A,B,C,D,F,G,H,J et K)
(11) recombinantes circulantes (CRF : Circulating Recombinant Forms)
ainsi que des formes
(11,14)
. La répartition géographique des différents sous-types et recombinants est maintenant assez bien définie
(15,16)
. Certains variants VIH-1 n’ont que 70 % d’homologie pour les gènes GAG et POL avec les isolats de référence et seulement 50 % pour le gène E
NV. Ces différences peuvent expliquer l’échec du diagnostic de l’infection chez certains
(17) patients . Les différentes souches du VIH-2 présentent des communautés antigéniques avec le virus simien SIV quelles que soient les protéines virales considérées (p rotéines d’enveloppe et protéines internes ; hétérogénéité : 30 %) ; elles présentent moins de 40 % d’homologie avec les protéines d’enveloppe du VIH-1
(3,18,19,20)
. Le VIH-2 est moins pathogène que le VIH-1, la période de latence est plus longue avec une évolution vers la maladie plus lente, les titres viraux sont plus bas et les taux de transmission horizontale et verticale sont plus faibles
(21,22,23,24)
.
Les antigènes VIH et les anticorps apparaissent et sont détectables à différents stades de l’infection
(25,26,27)
.
Le diagnostic d’une infection à VIH repose en pratique courante sur la détection des anticorps sériques anti-VIH par technique ELISA
(28,29,30)
. Cependant, il existe une période de 3 semaines en moyenne entre la contamination et l’apparition des premiers anticorps. Durant cette période, l’antigène p24 est présent chez la majorité des patients infectés par le VIH-1, quelle que soit leur origine géographique
(31,32)
. Le dosage Access HIV combo permet la détection des anticorps anti-VIH-1 et anti-VIH-2. Il utilise également des réactifs contenant des anticorps monoclonaux pour la détection de l’antigène p24 du VIH-1 avant séroconversion, afin de réduire la fenêtre de séroconversion et d’améliorer la détection précoce de l’infection par le VIH
(33,34,35,36)
.
3 Principes du test
Access HIV combo est un dosage immuno-enzymatique de type sandwich en 2 étapes.
Dans une première étape, échantillon, particules paramagnétiques, anticorps monoclonaux anti-p24 biotinylés et additif billes sont mélangés. Les particules paramagnétiques sont sensibilisées avec une protéine recombinante du VIH-1, des polypeptides VIH-1-O et VIH-2 et des anticorps anti-p24 du VIH-1.
Après incubation dans une cuvette réactionnelle, les produits liés à la phase solide sont fixés dans un champ magnétique tandis que les produits non liés sont éliminés par lavage.
Dans une deuxième étape, trois polypeptides et la streptavidine marqués à la phosphatase alcaline ainsi que l’additif conjugué sont ajoutés.
Après incubation, la séparation dans un champ magnétique et le lavage permettent l’élimination des produits non liés.
Un substrat chimioluminescent (Lumi-Phos 530) est ajouté et la lumière générée par la réaction enzymatique est mesurée à l’aide d’un luminomètre. La production de photons est fonction de la quantité de conjugué enzymatique présente à la fin de la réaction. La quantité de lumière mesurée pour un
échantillon permet de conclure à la présence ou l’absence d’anticorps (anti-VIH-1 et / ou anti-VIH-2) et / ou d’antigène p24, en la comparant à une valeur seuil déterminée lors de la calibration du test sur
B42398D Access HIV combo
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