Roche VENTANA PD-L1 (SP142) Assay Manuel utilisateur

VENTANA PD-L1 (SP142) Assay
Guide d’interprétation pour
l’algorithme d’évaluation par étapes du cancer
bronchique non à petites cellules
avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
2
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
Table des matières
Introduction
4
Utilisation prévue
Utilisation prévue du produit
Objectif du guide d’interprétation
5
5
5
Évaluation clinique
6
Présentation de la coloration
6
Algorithme d’évaluation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour
le NSCLC
7
Déroulement du traitement des échantillons
9
Contrôles
10
Caractéristiques de la coloration — NSCLC
11
Différentiation de la coloration des TC et de la coloration des IC : 15
Méthode d’évaluation
17
Évaluation de la coloration de PD-L1 d’agrégats d’IC :
18
Évaluation de la coloration de PD-L1 dans les IC présentes sous forme
de cellules isolées :
19
Méthodes d’évaluation : difficultés et écueils
20
Images de référence
Expression des TC
Expression des IC — Agrégats
Expression des IC — Diffusion sous forme de cellules isolées
Exemples de cas : < 1 % de TC et IC < 1 %
Exemples de cas : ≥ 1 % de TC, IC ≥ 1 %
Exemples de cas : < 1 % de TC, mais IC ≥ 1 %
Cas difficiles
23
23
24
25
26
28
30
32
Artefacts de coloration
34
Impact des conditions pré-analytiques sur le test VENTANA
PD-L1 (SP142) Assay
37
Conditions de fixation acceptables pour obtenir des résultats de
coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay
37
Stabilité de l’antigène sur des coupes de tissu
38
Références
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
39
3
Introduction
Le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay est un test immunohistochimique
qui utilise un anticorps primaire monoclonal de lapin anti-PD-L1 pour
reconnaître la protéine-ligand de mort programmée 1 (PD-L1). Ce test
a été mis au point conjointement par Roche/Ventana Medical Systems,
Inc. et Roche/Genentech afin d’identifier les patients atteints d’un
cancer bronchique non à petites cellules (NSCLC) localement avancé
ou métastatique les plus susceptibles de répondre positivement à un
traitement par TECENTRIQ® (atezolizumab).
Le carcinome du poumon, ou cancer bronchique, est le cancer le plus
fréquent dans le monde depuis plusieurs décennies et demeure la
cause majeure de mortalité liée au cancer dans le monde. On estime
qu’il représente 12,9 % de tous les nouveaux cas de cancer et qu’il
est responsable de près de 1,59 million de décès chaque année dans
le monde, soit environ un décès sur cinq liés au cancer1. Rien qu’aux
États-Unis, on estime à environ 234 030 le nombre de nouveaux cas
de cancer du poumon et 154 050 le nombre de décès liés à ce cancer
en 20182. Bien que des progrès aient été faits en matière de diagnostic
et de traitement, le pronostic demeure mauvais avec de faibles taux
de survie à long terme, quel que soit le stade. Au cours des trois
dernières décennies, le carcinome du poumon a connu la plus faible
amélioration quant au taux de survie par rapport aux autres cancers3.
Le carcinome bronchique non à petites cellules (NSCLC), l’un des
deux principaux types de carcinome du poumon, représente près de
75 % de tous les cas de carcinome du poumon4. Chez près de la moitié
des patients chez qui le NSCLC a nouvellement été diagnostiqué, la
maladie s’est déjà métastasée, réduisant ainsi nettement la probabilité
de survie. Le taux de survie relatif à cinq ans chez les patients atteints
d’un NSCLC avec métastases est de 5,2 %4. La majorité des patients
atteints de NSCLC présentent une maladie inopérable de stade
localement avancé (stade IIIB) ou une maladie métastatique (stade IV),
pour laquelle il n’existe actuellement aucun traitement curatif. En
moyenne, ces patients meurent dans l’année qui suit le diagnostic.
L’amélioration des résultats cliniques du carcinome du poumon pourra
certainement être possible grâce à une meilleure compréhension des
événements moléculaires à la base de sa pathogenèse, en identifiant
de nouveaux biomarqueurs cibles et en développant de nouvelles
options de traitement.
PD-L1 est une protéine transmembranaire qui réduit les réponses
immunitaires en se liant à ses deux récepteurs, programmed death-1
(PD-1) et B7.1 (Figure 1). PD-1 est un récepteur inhibiteur exprimé
sur les lymphocytes T suite à l’activation de ces derniers, cette
activation perdurant en état de stimulation chronique comme dans
les cas d’infection chronique ou de cancer5. La liaison de PD-L1 et
de PD-1 empêche la prolifération des lymphocytes T, la production
des cytokines et l’activité cytolytique, ce qui entraîne l’inactivation
fonctionnelle ou l’épuisement des lymphocytes T. B7.1 est une
molécule exprimée sur les cellules présentatrices d’antigène et sur les
lymphocytes T activés. La liaison de la protéine PD-L1 et du récepteur
B7.1 sur les lymphocytes T et les cellules présentatrices d’antigène
peut entraîner une diminution des réponses immunitaires, avec une
4
Figure 1 : Voie PD-1/PD-L1
inhibition de l’activation des lymphocytes T et de la production des
cytokines6. L’expression de PD-L1 sur les cellules immunitaires et
tumorales a été observée7,8. L’expression aberrante de PD-L1 sur les
cellules tumorales (TC) semblerait entraver l’immunité antitumorale
et entraîner une évasion immunitaire5. L’interruption de la voie PD-L1/
PD-1 représente donc une stratégie intéressante pour redynamiser
l’immunité des lymphocytes T spécifiques de la tumeur supprimée par
l’expression de PD-L1 dans le micro-environnement
tumoral. L’expression élevée de PD-L1 est associée à un mauvais
pronostic chez les patients atteints de NSCLC9.
L’atezolizumab est un anticorps monoclonal humanisé présentant
une région Fc qui se lie à PD-L1 et bloque les interactions avec les
récepteurs PD-1 et B7.1. L’atezolizumab est une immunoglobuline
kappa IgG1 non glycosylée dont la masse moléculaire calculée est de
145 kD.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
Utilisation prévue
Utilisation prévue du produit
Objectif du guide d’interprétation
Consulter la notice du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour une
description détaillée de l’utilisation prévue de ce produit.
Le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay interpretation guide est destiné
à aider les anatomopathologistes à interpréter et à évaluer les tissus
tumoraux NSCLC colorés avec le test VENTANA PD L1 (SP142) Assay.
Remarque : L’utilisation de ce diagnostic avec les traitements indiqués
peut ne pas être autorisée dans tous les pays. Consultez votre
représentant local Roche pour les autorisations locales.
• Les photographies incluses dans ce guide de formation illustrent les
profils de coloration, ainsi que la portée des évaluations de PD-L1,
qui peuvent être présents dans les tissus tumoraux NSCLC colorés
avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay.
• L’utilisation des amygdales comme tissu de contrôle dans le
contexte de l’évaluation de PD-L1, ainsi que les caractéristiques et
performances de coloration correspondantes sont traitées.
• Les cas difficiles, les artéfacts de coloration et l’impact des
conditions pré-analytiques sur le test sont également abordés.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
5
Évaluation clinique
Présentation de la coloration
Le test de coloration immunohistochimique (IHC) VENTANA PD-L1
(SP142) Assay génère une coloration dans les cellules tumorales
(TC, Figure 2) ainsi que dans les cellules immunitaires infiltrant les
tumeurs (IC, Figure 3). Les caractéristiques détaillées de la coloration
sont décrites à la section « Caractéristiques de la coloration ».
H&E 20x
PD-L1 20x
Figure 2 : Tissu de NSCLC présentant une coloration membranaire circonférentielle modérée à forte des TC.
H&E 20x
PD-L1 20x
Figure 3 : Tissu de NSCLC présentant une coloration punctiforme et linéaire marron foncé des IC.
6
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Algorithme d’évaluation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour le NSCLC
Le tissu tumoral NSCLC coloré avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay sera évalué selon une approche par étapes, conformément aux critères
indiqués dans le Tableau 1. Les cellules tumorales (TC) sont évaluées en fonction du pourcentage des cellules tumorales viables présentant une
coloration membranaire visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité. Les cellules immunitaires infiltrant la tumeur (IC) sont évaluées en fonction
du pourcentage de la zone tumorale occupée par des IC présentant une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité. Un échantillon doit être
considéré comme ayant une expression significative de PD-L1 si l’échantillon présente une expression de PD-L1 dans ≥ 1 % de TC ou si le niveau
d’expression de PD-L1 est de IC ≥ 1 %. Les lames colorées avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay seront d’abord utilisées pour évaluer la
coloration des TC (étape 1 dans le Tableau 1). Si l’échantillon présente une coloration membranaire visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans
≥ 1 % de TC, le cas se verra attribuer un niveau d’expression de PD-L1 de ≥ 1 % de TC. Si l’échantillon contient < 1 % de TC colorées, la lame sera alors
utilisée pour évaluer la coloration des IC (étape 2 du Tableau 1). Si l’échantillon présente une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans une
quantité d’IC occupant ≥ 1 % de la zone tumorale, le cas se verra attribuer un niveau d’expression de PD-L1 de IC ≥ 1 % (IC PD-L1 positives dans ≥ 1 %
de la zone tumorale). Si l’échantillon présente une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans une quantité d’IC couvrant < 1 % de la zone
tumorale, le cas se verra attribuer un niveau d’expression de PD-L1 de < 1 % de TC et de IC < 1 %. Le processus d’évaluation par étapes est illustré à la
Figure 4.
Les échantillons de tissu tumoral NSCLC obtenus au moyen d’une biopsie par résection, d’une biopsie par excision, d’une biopsie au trocart et de toute
autre procédure de biopsie effectuée sur des sites primaires et métastatiques sont acceptables. Ce test n’a pas été validé pour une utilisation avec des
échantillons de cytologie ou des échantillons d’os décalcifiés. Un tissu est considéré adéquat pour une interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP142)
Assay s’il contient au moins 50 cellules tumorales viables. Le stroma tumoral associé n’est pas nécessaire pour l’évaluation des TC. La présence du
stroma tumoral est essentielle pour l’évaluation des IC. La coloration nécessite trois coupes de chaque cas, une première coupe de tissu sériée pour la
coloration H&E (hématoxyline et éosine), une deuxième pour la coloration avec le réactif de contrôle négatif, et une troisième pour la coloration avec
le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Un échantillon de tissu amygdalien bénin préqualifié doit être utilisé comme tissu de contrôle positif et négatif
pour chaque cycle de coloration. Des instructions détaillées concernant les critères de qualification et l’acceptabilité du tissu de contrôle sont fournies
dans le Tableau 2. Le tissu du patient doit être coloré avec un réactif de contrôle négatif afin d’évaluer la coloration de fond non spécifique.
Tableau 1 : Algorithme d’évaluation par étapes du VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour le NSCLC - ≥ 1 % de TC ou IC ≥ 1 %
Étape 1 : Évaluation de la coloration des cellules tumorales (TC)
Expression de PD-L1
Présence d’une coloration membranaire visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité
dans ≥ 1 % des cellules tumorales
≥ 1 % de TC
Absence de coloration visible de PD-L1 (OU) présence d’une coloration membranaire
visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans < 1 % des cellules tumorales.
Passer à l’étape 2.
Étape 2 : Évaluation de la coloration des cellules immunitaires
infiltrant la tumeur (IC)
Expression de PD-L1
Présence d’une coloration visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, sur une quantité
de cellules immunitaires infiltrant la tumeur couvrant ≥ 1 % de la zone tumorale
occupée par des cellules tumorales, du stroma intratumoral associé et du stroma
péritumoral contigu
IC ≥ 1 %
Absence de coloration visible de PD-L1 (OU) présence d’une coloration visible de
PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans une quantité de cellules immunitaires infiltrant
la tumeur couvrant < 1 % de la zone tumorale occupée par des cellules tumorales, du
stroma intratumoral associé et du stroma péritumoral contigu
< 1 % de TC et IC < 1 %
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
7
ÉTAPE 1
L’échantillon de
tissu de NSCLC
présente-t-il
une expression
de PD‑L1 dans
≥ 1 % des TC ?
Oui
Non
ÉTAPE 2
Oui
Le tissu de NSCLC
présente-t-il une
coloration de PDL1 sur les IC dans
≥ 1 % de la zone
tumorale ?
Non
≥ 1 % de TC
IC ≥ 1 %
< 1 % de TC et IC < 1 %
Figure 4 : Processus d’évaluation par étapes du VENTANA PD-L1 (SP142) Assay sur des tissus de NSCLC (images grossies 10x).
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Déroulement du traitement des échantillons
Les coupes de 4 μm d’épaisseur
sont placées sur des lames de
verre chargées positivement.
(Trois coupes sériées sont
nécessaires)
L’échantillon de tissu NSCLC
est fixé dans du formol neutre
tamponné à 10 % pendant 6 à
72 heures.
Adéquation de l’échantillon : au
moins 50 cellules tumorales viables*
La lame H&E
est-elle
acceptable ?
NSCLC, H&E
La coloration H&E est effectuée.
Non
Oui
Une coupe est colorée avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay.
Une coupe est colorée avec l’anticorps Rabbit Monoclonal Negative
Control Ig (Negative Reagent Control, NRC).
Un échantillon de tissu amygdalien est utilisé comme tissu de
contrôle positif et négatif.
Répéter la
coloration**
Répéter la
coloration**
Non
La lame de
contrôle portant le
tissu amygdalien
est-elle
acceptable ?
Tissu amygdalien, IHC
Oui
Répéter la
coloration**
Non
La lame NRC estelle acceptable ?
NSCLC, NRC
Oui
Répéter la
coloration**
Non
La lame IHC PD-L1
est-elle acceptable ?
* Le stroma tumoral n’est pas nécessaire pour l’évaluation des TC.
La présence du stroma tumoral est essentielle pour l’évaluation des IC.
** La répétition peut être effectuée sur le même tissu ou sur un autre
échantillon de tissu du patient, selon le cas.
(Toutes les images du tissu tumoral NSCLC sont obtenues avec un
agrandissement 1x. Les images du tissu amygdalien sont obtenues avec un
agrandissement 4x.)
Oui
NSCLC, IHC
Statut de PD-L1 relevé par un anatomopathologiste
expérimenté
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Contrôles
Les tissus de contrôle doivent être utilisés uniquement pour vérifier que les performances des tissus traités, des réactifs de test et des instruments
sont correctes, et non comme une aide à la formulation d’un diagnostic spécifique sur des échantillons de patients. Pour chaque cycle de
coloration, il est recommandé d’utiliser un tissu de contrôle par ensemble de conditions de test (les contrôles sur lame sont acceptables).
Le tissu amygdalien humain bénin est un tissu de contrôle idéal car il contient des cellules immunitaires et épithéliales à coloration positive
et négative et peut servir de tissu de contrôle positif et négatif pour VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Le tissu amygdalien coloré avec le test
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay affiche une coloration des lymphocytes et des macrophages situés dans les centres germinaux, avec des
cellules immunitaires colorées pour PD-L1 dispersées parmi les cellules PD-L1-négatives situées dans les régions interfolliculaires. En outre,
une coloration diffuse est observée dans les cellules épithéliales cryptiques réticulées, avec une absence de coloration des cellules épithéliales
pavimenteuses superficielles.
Le tissu amygdalien fixé dans du NBF à 10 % et traité de la même manière que les tissus du patient doit être qualifié et utilisé comme tissu de
contrôle. Le tissu amygdalien de contrôle doit présenter une coloration acceptable pour qu’un essai soit jugé concluant. Si le tissu amygdalien ne
présente pas une coloration acceptable, le test est considéré comme non valide et doit être répété, en incluant des échantillons du patient. Les
critères de qualification et d’acceptabilité applicables aux tissus amygdaliens de contrôle sont indiqués dans le Tableau 2.
Tableau 2 : Critères de qualification et d’acceptabilité des tissus amygdaliens
Acceptable
Inacceptable
Éléments tissulaires négatifs : cellules immunitaires négatives pour PD-L1 dans
les régions interfolliculaires avec épithélium pavimenteux superficiel négatif.
Coloration de fond non spécifique excessive gênant l’identification des cellules
positives pour PD-L1.
Éléments tissulaires positifs : coloration modérée à forte de PD-L1 observée dans
les lymphocytes et les macrophages situés dans les centres germinaux, avec
coloration diffuse dans les cellules épithéliales cryptiques réticulées.
Coloration inexistante à faible de PD-L1 observée dans les lymphocytes et les
macrophages situés dans les centres germinaux et dans les cellules épithéliales
cryptiques réticulées.
PD-L1 20x
PD-L1 4x
Épithélium pavimenteux
superficiel
Coloration de fond non
spécifique
PD-L1 20x
PD-L1 20x
Épithélium cryptique
Faible coloration dans les lymphocytes, les
macrophages et les cellules épithéliales
Région
interfolliculaire
Centre germinal
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Caractéristiques de la coloration — NSCLC
La coloration de PD-L1 avec le test VENTANA PD-L1 (SP142)
Assay de tissus tumoraux NSCLC génère une coloration des TC
(Figures 5 à 7) ainsi que des IC (Figures 8 à 12). Les images de
ce guide d’interprétation sont des clichés de lames numérisées.
L’agrandissement utilisé est indiqué pour chaque image.
Coloration des TC :
H&E 20x
PD-L1 20x
Forte coloration des TC
Figure 5 : Les TC présentent souvent une coloration membranaire circonférentielle partielle ou complète, modérée à forte, avec ou sans
composante cytoplasmique.
H&E 20x
PD-L1 20x
Faible coloration des TC
Figure 6 : Une faible coloration membranaire est parfois observée et doit être confirmée par un examen sous fort grossissement.
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11
H&E 40x
PD-L1 40x
Coloration basolatérale des TC
Figure 7 : Une coloration basolatérale de la membrane peut être observée sous forme de coloration circonférentielle partielle et est prise en
compte dans l’évaluation.
Coloration des IC :
Les IC sont les cellules immunitaires présentes dans le stroma
intratumoral et dans le stroma péritumoral contigu. La coloration avec
le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay met en évidence une population
hétérogène de cellules immunitaires. La majorité de ces cellules est
morphologiquement similaire aux lymphocytes, aux macrophages, aux
cellules dendritiques et aux granulocytes.
H&E 20x
PD-L1 20x
Agrégat d’IC dans
le stroma
péritumoral
Agrégat d’IC dans
le stroma
intratumoral
Figure 8 : Les IC présentent une coloration punctiforme ou linéaire marron foncé qui constitue le profil de coloration des IC prédominant dans
la majorité des tissus. La coloration des IC peut être observée sous forme d’agrégats présents soit dans le stroma intratumoral, soit dans le stroma
péritumoral (interface tumeur-stroma), soit aux deux emplacements.
12
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H&E 40x
PD-L1 40x
IC isolées dispersées
parmi les cellules tumorales
Figure 9 : Une coloration des IC peut également être observée sous forme de cellules isolées à répartition focale ou diffuse ou de petits agrégats
dispersés (diffusion de cellules isolées) parmi les cellules tumorales. Ce profil peut être observé en association avec des agrégats dans le stroma
tumoral. La coloration des IC correspond aux cellules immunitaires situées parmi les cellules tumorales dans l’image H&E.
H&E 20x
PD-L1 20x
Coloration circonférentielle
des IC
H&E 20x
PD-L1 20x
Coloration réticulaire des IC
Figure 10 : Un profil de coloration réticulaire ou membranaire circonférentielle de PD-L1 peut être observé dans les IC.
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H&E 40x
PD-L1 40x
Neutrophiles
Figure 11 : Une coloration des IC peut être observée dans les neutrophiles sous forme de coloration punctiforme fine. La coloration des
neutrophiles peut être dispersée parmi les cellules tumorales, dans le stroma intratumoral ou péritumoral. Les neutrophiles intra-vasculaires et/ou
les neutrophiles dans les abcès ou les zones nécrotiques ne sont pas inclus dans l’évaluation.
H&E 40x
PD-L1 40x
Macrophages
alvéolaires
Figure 12 : Les macrophages alvéolaires peuvent présenter une coloration membranaire circonférentielle d’une intensité modérée à forte. Un
examen des lames H&E correspondantes peut aider à distinguer ce phénomène de la coloration des TC.
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Différentiation de la coloration des TC et de la
coloration des IC :
Une coloration des TC peut être observée en association avec une
coloration des IC. Un examen de la lame H&E correspondante, associé
à un examen sous fort agrandissement de la lame colorée pour PD-L1,
permettront de différencier les TC des IC. Associé à un examen sous
fort agrandissement de la lame colorée pour PD-L1, cet examen peut
aider à distinguer la coloration des TC de la coloration des IC. Les
images suivantes représentent différents profils couramment observés
dans la pratique clinique, lorsque la coloration des TC et la coloration
des IC sont observées simultanément (Figures 13 à 15).
H&E 20x
IC rares voire inexistantes parmi
les TC sur la lame H&E
PD-L1 20x
Forte coloration
des TC
Agrégat d’IC dans le stroma
Figure 13 : Les TC présentent une forte coloration membranaire, avec de rares IC parmi les cellules tumorales identifiées sur la lame H&E. Dans
ce scénario, les IC devraient être évaluées dans les zones qui ne présentent pas de forte coloration des TC.
H&E 20x
Nombreuses IC parmi
les TC sur la lame H&E
PD-L1 20x
Coloration des IC dispersées
parmi les cellules tumorales
Faible coloration
des TC
Figure 14 : Les TC présentent une coloration membranaire faible à modérée, avec de nombreuses IC parmi les TC identifiées sur la lame H&E.
Noter la présence d’une forte coloration punctiforme des IC présentes parmi les TC.
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15
PD-L1 40x
H&E 40x
IC rares voire inexistantes
parmi
les TC sur la lame H&E
Coloration perlée des TC
H&E 20x
IC rares voire inexistantes parmi
les TC sur la lame H&E
PD-L1 20x
Coloration perlée des TC
Figure 15 : Si la lame H&E ne présente que peu d’IC identifiables et qu’un profil de coloration granulaire ou perlé est observé parmi les TC, alors
cette coloration doit être attribuée aux TC plutôt qu’aux IC.
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Méthode d’évaluation
Les tissus tumoraux NSCLC colorés avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay serviront à évaluer la coloration des TC et la coloration des IC
selon une approche par étapes décrite dans le Tableau 2.
• Évaluation des TC : la coloration des TC est évaluée en fonction du pourcentage de cellules tumorales viables présentant une
coloration membranaire, quelle qu’en soit l’intensité. La coloration membranaire doit être visible sous forme de coloration curvilinéaire
le long de la membrane de la cellule tumorale même si elle est associée à une qualité granulaire ou perlée. Une coloration cytoplasmique peut
être observée avec une coloration de la membrane, mais elle n’est pas incluse pour l’évaluation des cellules tumorales.
• Évaluation des IC : les IC sont évaluées en fonction du pourcentage de la zone tumorale occupé par des cellules immunitaires présentant une
coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité. Toute coloration des IC, quel que soit le type de cellules ou leur emplacement, est incluse.
-Zone tumorale : la zone tumorale pour l’interprétation du test PD-L1 (SP142) est définie comme la surface occupée par des cellules
tumorales viables, le stroma intratumoral associé et le stroma péritumoral contigu (Figures 16A à 16C). Les tumeurs nécrotiques sont
exclues de cette définition de la zone tumorale (Figure 16D).
-Dans les échantillons de tissu fragmentés, y compris les biopsies, où la distinction entre le stroma intratumoral et le stroma péritumoral
est difficile, seul le stroma contigu aux différents foyers tumoraux est inclus dans la définition de la zone tumorale. Le stroma faisant partie du
fragment de tissu, mais non contigu à une tumeur viable est exclu (Figure 16B).
A
H&E 4x
B
H&E 1x
Stroma
péritumoral
Zone tumorale
Zone tumorale
C
Cellules
tumorales
H&E 1x
Stroma
intratumoral
Zone tumorale
D
H&E 2x
X
XX
X
X
XX
Figure 16 : A Zone tumorale ; B Zone tumorale dans un échantillon prélevé par résection ; C Zone
tumorale dans un échantillon de biopsie ; et D Zone tumorale dans un échantillon présentant une
nécrose.
Exclure la nécrose
de la zone
tumorale
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17
Évaluation de la coloration de PD-L1 d’agrégats d’IC :
H&E 1x
Examen de la lame colorée par
H&E afin d’y déceler la présence
d’une tumeur, d’une nécrose,
détermination de l’adéquation de
l’échantillon (au moins 50 cellules
tumorales viables*), et évaluation de
la zone tumorale.
Zone tumorale
PD-L1 10x
Seule une coloration
des IC est observée
Examiner la lame colorée de PD-L1
sous un agrandissement de 10x
ou 20x et confirmer le profil de
coloration global correspond aux
IC, aux TC ou aux deux.
Zone tumorale
PD-L1 4x
Entourer visuellement les agrégats
d’IC aussi précisément que possible
sous un agrandissement de
2x ou 4x.
Agrégats d’IC
PD-L1 4x
Combiner la coloration des
agrégats et estimer le pourcentage
de la zone tumorale occupé par
les agrégats d’IC en utilisant un
agrandissement de 2x ou 4x. Le
résultat de l’évaluation des IC pour
ce cas est ≥ 1 %. La section Images
de référence doit être utilisée
comme aide à l’évaluation.
* Le stroma tumoral n’est pas nécessaire pour l’évaluation des TC.
La présence du stroma tumoral est essentielle pour l’évaluation des IC.
18
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
Évaluation de la coloration de PD-L1 dans les IC présentes
sous forme de cellules isolées :
H&E 10x
Densité cellulaire en cas de diffusion sous forme de cellules isolées
IC < 1 %
PD-L1 10x
Densité cellulaire en cas de diffusion sous forme de cellules isolées
IC ≥ 1 %
Les IC présentes sous forme de cellules isolées sont évaluées en fonction de la densité de la diffusion sous forme de cellules isolées, en utilisant
les images de référence fournies dans ce guide.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
19
Méthodes d’évaluation : difficultés et écueils
1. Coloration dans les débris nécrotiques et dans les débris glandulaires intraluminaux : les débris nécrotiques ou les cellules
immunitaires situées en périphérie des régions nécrotiques ou apoptotiques peuvent présenter une coloration de PD-L1. Cette coloration
peut être granulaire et être confondue avec la coloration des IC. Cette coloration ainsi que la coloration des neutrophiles observée sous forme
d’agrégats doivent être exclues de l’évaluation (Figures 18 et 19).
H&E 10x
PD-L1 10x
Coloration sur les
débris nécrotiques
Figure 18 : Débris nécrotiques présentant une coloration de PD-L1. La coloration des débris nécrotiques ne doit pas être incluse dans l’évaluation.
H&E 20x
PD-L1 20x
Coloration des
cellules tumorales
en bordure
Coloration des
débris intraluminaux
Figure 19 : Débris intraluminaux présentant une coloration de PD-L1. Ils ne doivent pas être inclus dans l’évaluation. Quelques cellules tumorales
viables en bordure de la coloration de PD-L1 qui doivent être incluses dans l’évaluation des TC.
20
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
2. Métastase au niveau d’un ganglion lymphatique : le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay peut être utilisé pour tester des échantillons primaires
et des échantillons métastatiques. Les échantillons métastatiques peuvent provenir de différents organes, parmi lesquels les ganglions lymphatiques,
le foie, la glande surrénale, les os et les tissus mous. Les métastases osseuses ne conviennent pas pour la coloration avec le test VENTANA PD-L1
(SP142) Assay. Les métastases des ganglions lymphatiques méritent une attention particulière, compte tenu de la présence de cellules immunitaires
natives qui présentent une coloration de PD-L1. Dans les tumeurs qui se sont métastasées dans les ganglions lymphatiques, seule la coloration des
infiltrats de cellules immunitaires contiguë aux cellules tumorales doit être prise en compte pour déterminer le pourcentage d’IC présentant une
coloration de PD-L1 (Figure 20).
H&E 4x
PD-L1 4x
Tissu LN normal
situé en dehors
de la zone tumorale —
exclu de
l’évaluation
Zone tumorale
Figure 20 : La coloration de PD-L1 dans un NSCLC métastasé dans un ganglion lymphatique peut être difficile en raison de la présence de
cellules immunitaires natives. L’image de droite montre les contours d’un NSCLC métastasé. La définition de la zone tumorale est la même pour les
lésions primaires et métastatiques.
3. Coloration des macrophages alvéolaires : coloration de PD-L1 dans les macrophages alvéolaires (Figure 21). La coloration de PD-L1
dans les macrophages alvéolaires ne peut être prise en compte pour la détermination du pourcentage d’IC présentant une coloration de PD-L1
que si les macrophages sont piégés dans la masse tumorale et contigus aux cellules tumorales. Une forte coloration des macrophages alvéolaires
peut être confondue avec une coloration des TC et doit être confirmée par un examen de la lame H&E correspondante.
H&E 10x
PD-L1 10x
Macrophages
alvéolaires
Macrophages
alvéolaires
Figure 21 : Coloration de PD-L1 dans les macrophages alvéolaires situés en bordure de la tumeur.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
21
4. Cellules immunitaires intravasculaires : le système vasculaire du stroma tumoral peut présenter des cellules immunitaires positives pour
PD-L1 (Figure 22). Elles ne doivent pas être prises en compte pour l’évaluation des IC.
H&E 40x
PD-L1 40x
Figure 22 : Les cellules immunitaires intravasculaires (des neutrophiles dans le cas présent) ne sont pas prises en compte pour l’évaluation des IC.
5. Pigments anthracosiques et d’hémosidérine : les pigments anthracosiques et/ou les pigments d’hémosidérine peuvent interférer avec
l’évaluation des IC. Un examen des lames colorées avec le réactif de contrôle négatif ainsi qu’un examen sous fort grossissement peuvent s’avérer
nécessaires dans ces situations. Cela est illustré à la Figure 23.
PD-L1 20x
NRC 20x
H&E 20x
Pigment d’hémosidérine
Pigment anthracosique
Pigment d’hémosidérine
Coloration
des IC
Pigment anthracosique
Figure 23 : Coloration de PD-L1 dans les IC adjacentes à du pigment anthracosique et coupe de tissu correspondante colorée avec un réactif de
contrôle négatif et par H&E.
22
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
Images de référence
Expression des TC
< 1 % de TC
≥ 1 % de TC
Toutes les images sont grossies 10x
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
23
Expression des IC — Agrégats
IC < 1 %
IC ≥ 1 %
Toutes les images sont grossies 10x
24
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
Expression des IC — Diffusion sous forme de cellules isolées
IC < 1 %
IC ≥ 1 %
Toutes les images sont grossies 10x
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
25
Exemples de cas : < 1 % de TC et IC < 1 %
H&E 1x
PD-L1 1x
A
A
A
H&E 4x
A
PD-L1 4x
Pigment anthracosique
Pigment anthracosique
B
B
A
NRC 4x
B
PD-L1 20x
Pigment anthracosique
Cas 1 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 1 % de TC et de IC < 1 %. Scores : TC : 0 % ; IC : < 1 %. Ce cas présente
une coloration des débris intraluminaux qui doit être exclue de l’évaluation des IC. À noter également la présence de pigment anthracosique.
26
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
H&E 1x
PD-L1 1x
A
A
B
NRC 1x
B
A
H&E 4x
A
PD-L1 4x
B
H&E 4x
B
PD-L1 4x
Cas 2 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 1 % de TC et de IC ≥ 1 %. Scores : TC : 0 % et IC : 2 %. Ce cas est une
métastase située dans un ganglion lymphatique qui présente une coloration interfaciale à répartition focale des cellules immunitaires. À noter que
la tumeur est clairement séparée du tissu du ganglion lymphatique, ce qui permet de délimiter plus facilement les contours de la tumeur.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
27
Exemples de cas : ≥ 1 % de TC, IC ≥ 1 %
PD-L1 1x
H&E 1x
A
A
A
H&E 10x
A
PD-L1 10x
A
H&E 20x
A
PD-L1 20x
Cas 3 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de ≥ 1 % de TC. Scores : TC : 15 % et IC : 1 %. À noter la présence d’une faible
coloration des TC.
28
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
PD-L1 1x
H&E 1x
C
B
B
A
A
C
A
H&E 4x
A
PD-L1 4x
B
PD-L1 4x
C
PD-L1 10x
Cas 4 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de ≥ 1 % de TC. Scores : TC : 80 % et IC : 2 %. Ce cas illustre une coloration
d’intensité variable des TC associée à une coloration des IC. Dans les régions présentant une forte coloration des TC, il convient de porter une
attention particulière au stroma intratumoral. Dans les régions présentant une coloration faible à modérée des TC, il est relativement facile
d’évaluer les IC. Un examen de la lame H&E correspondante aide à distinguer la coloration des TC de la coloration des IC. À noter également que la
nécrose géographique n’est pas incluse dans l’estimation du pourcentage d’IC.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
29
Exemples de cas : < 1 % de TC, mais IC ≥ 1 %
PD-L1 1x
H&E 1x
B
B
A
A
A
H&E 4x
A
PD-L1 4x
B
H&E 10x
B
PD-L1 10x
Cas 5 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 1 % de TC, mais de IC ≥ 1 %. Scores : TC : 0 % et IC : 5 %. Ce cas présente
une diffusion sous forme de cellules isolées relativement uniforme. L’estimation du pourcentage d’IC doit être effectuée à l’aide des images de
référence Expression des IC — Diffusion sous forme de cellules isolées.
30
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
H&E 1x
PD-L1 1x
A
A
A
H&E 10x
A
PD-L1 10x
Cas 6 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 1 % de TC, mais IC ≥ 1 %. Scores : TC : 0 % et IC : 10 %. À noter la
concentration d’IC exprimant PD-L1 le long des bords de la tumeur dans le stroma.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
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Cas difficiles
PD-L1 1x
H&E 1x
B
B
A
A
A
PD-L1 10x
B
PD-L1 4x
C
IC discrètes sous faible
agrandissement
C
H&E 20x
C
PD-L1 20x
Macrophages
Cas 7 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 1 % de TC, mais de IC ≥ 1 %. Scores : TC : 0 % ; IC : 5 %. Ce tissu illustre
une coloration focale des IC et la présence d’une coloration des macrophages, qui peuvent souvent être confondus avec des TC compte tenu de la
coloration circonférentielle. À noter également la présence d’une légère coloration des IC qui n’est pas visible sous faible agrandissement. Ce cas
illustre l’importance de l’examen du tissu coloré de PD-L1 sous fort grossissement pour distinguer la coloration des macrophages de la coloration
des TC en utilisant la lame H&E correspondante.
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
H&E 1x
PD-L1 1x
A
B
A
B
A
PD-L1 20x
B
PD-L1 10x
Agrégat d’IC
Coloration punctiforme
des IC
Coloration des TC
Cas 8 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de ≥ 1 % de TC. Scores : TC : 10 % ; IC : 15 %. Sous fort grossissement, noter la
faible coloration membranaire des cellules tumorales et la forte coloration punctiforme des IC présentes parmi les cellules tumorales (Régions A
et B). Ce cas illustre l’importance du recours à un fort grossissement pour distinguer la coloration des IC de la coloration des TC.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
33
Artefacts de coloration
Les artéfacts signalés dans cette section peuvent être observés sur les lames colorées avec le Negative Reagent Control et sur les lames colorées
avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. La présence de ces artéfacts peut nécessiter la répétition de la coloration s’ils interfèrent avec
l’interprétation de la coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Toujours examiner la lame Negative Reagent Control correspondante afin
de vérifier que la coloration de fond non spécifique se situe dans les limites acceptables.
PD-L1 2x
PD-L1 2x
Taches non
colorées
Taches non colorées : les taches non colorées sont des zones faiblement ou non colorées généralement circulaires dues à une bulle statique
qui s’est formée pendant la procédure de coloration. L’image de gauche représente un exemple d’une tache non colorée comparée à la coloration
appropriée représentée sur l’image de droite. Si la tache non colorée interfère avec l’interprétation de la lame colorée de PD-L1, un nouveau cycle
de coloration peut être nécessaire.
NRC 20x
Mouchetage
PD-L1 20x
Coloration spécifique
de PD-L1 dans les IC
Mouchetage : le mouchetage, représenté sur l’image de gauche, est une coloration non spécifique faible à modérée, qui apparaît sous la forme
d’un précipité granulaire fin réparti uniformément et qui se forme le plus souvent dans le cytoplasme. Le mouchetage n’est pas conforme aux
caractéristiques de coloration des IC ou des TC. Cet artéfact ne doit pas être confondu avec une coloration spécifique telle que représentée sur
l’image de droite.
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
PD-L1 20x
PD-L1 20x
Taches de DAB : les taches de DAB sont des taches circulaires qui peuvent se former en raison de DAB piégée sous la coupe tissulaire pendant
la procédure de coloration. Si cet artéfact interfère avec l’interprétation de la lame colorée pour PD-L1, répéter la coloration avec des lames non
colorées fraîches. Sur l’image de droite, la tache de DAB n’est pas présente sur la nouvelle coloration réalisée sur une coupe sériée.
NRC 10x
NRC 10x
Débris luminaux : le tissu amygdalien coloré à l’aide du VENTANA PD-L1 (SP142) Assay peut servir à la fois de tissu de contrôle positif et
négatif en raison de la présence d’éléments positifs et négatifs pour la coloration. Une coloration luminale due à une réactivité croisée avec un
antigène inconnu peut être observée sur l’image de tissu amygdalien coloré avec le NRC à gauche. Un exemple approprié de tissu amygdalien
coloré avec le NRC est représenté à droite. Si vous choisissez d’utiliser le NRC sur un tissu de contrôle amygdalien et que des débris luminaux
sont observés, l’échantillon ne devrait pas être utilisé comme tissu de contrôle.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
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NRC 10x
PD-L1 10x
Points de DAB
Coloration spécifique de
PD-L1 dans les IC
Points de DAB : une coloration de fond punctiforme non spécifique peut être observée sur du tissu de n’importe quel échantillon. Il s’agit de
petits artéfacts de colorations aléatoires générés par le processus d’amplification du système de détection. Par rapport à la coloration de PD-L1
des IC, les points de DAB sont plus petits et présentent une morphologie différente et plus nette que la coloration punctiforme des IC. La coloration
attendue des cellules immunitaires est visible sur l’image de droite.
NRC 4x
PD-L1 4x
Bruit de fond sérique
Coloration spécifique
de PD-L1 dans les IC
Bruit de fond sérique : le bruit de fond sérique est une coloration non spécifique qui se produit dans les espaces vasculaires et dans les
extravasations de sérum. Ce bruit de fond peut être observé en bas de chacune des images ci-dessus. Il ne doit pas être confondu avec une
coloration spécifique de PD-L1 sur les IC comme illustrée sur l’image de droite.
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
Impact des conditions pré-analytiques sur le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay
Conditions de fixation acceptables pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1
(SP142) Assay
• Ventana recommande d’effectuer la fixation pendant 6 à 72 heures dans du NBF à 10 %.
• Le formol zinc permet d’obtenir une coloration comparable à celle obtenue avec le NBF à 10 %.
• La fixation pendant moins de 6 heures n’est pas recommandée.
• Les échantillons fixés avec du Z-5 présentent une coloration non comparable à celle obtenue avec les échantillons fixés avec du NBF à 10 %. La
fixation au Z-5 n’est pas recommandée.
• PREFER (Anatech, Ltd.) et les fixateurs à l’alcool, y compris l’AFA (coloration plus faible) ne sont pas recommandés.
Tableau 4 : Coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay d’un tissu amygdalien avec différents fixateurs et pendant différents
temps de fixation
Temps de
fixation
(en
heures)
Fixateur
NBF à 10 %
Formol zinc
Z-5*
PREFER*
(Anatech, Ltd.)
AFA*
Alcool à 95 %*
1*
6
12
24
72
Recommandé
* Non recommandé
(toutes les images sont agrandies 20x)
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Stabilité de l’antigène sur des coupes de tissu
Les coupes de tissu tumoral NSCLC (lames non colorées) et de tissu amygdalien humain doivent être colorées dans les 2 mois qui suivent la
coupe. Passé ce délai, les coupes de tissu (lames non colorées) conservées à température ambiante affichent une perte de coloration importante
(Figure 24).
A
PD-L1 4x
Jour 0
B
PD-L1 4x
Après 2 mois
Figure 24 : Coupes sériées de tissu de NSCLC colorées lors du jour 0 (A) et après deux mois de conservation à température ambiante (B).
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 1 % de TC ou de IC ≥ 1 %
Références
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2020-07-15
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