MODE D'EMPLOI –
MILIEUX EN BOITES DE
PETRI PRETS A L'EMPLOI
PA-254444.02
Rev.: Juin 2003
BD Neomycin Agar with 5% Sheep Blood
APPLICATION
La BD Neomycin Agar with 5% Sheep Blood (gélose néomycine avec 5 % de sang de
mouton) est un milieu sélectif utilisé pour l'isolement des streptocoques des groupes A et B.
PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE
Méthode microbiologique.
Les streptocoques du groupe A de Lancefield (S. pyogenes) et les streptocoques du groupe B
(S. agalactiae) sont des bactéries Gram positives bêta-hémolytiques importantes sur le plan
médical. Blanchette et Lawrence ont ajouté de la néomycine à une gélose au sang de mouton
afin de favoriser la mise en évidence des streptocoques du groupe A de Lancefield et ceux du
groupe B, en empêchant la croissance des autres microorganismes hémolytiques.1,2 La plupart
des staphylocoques, les Enterobacteriaceae, Neisseria, Listeria et certaines Pseudomonas
spp. sont inhibés. Les streptocoques autres que ceux appartenant aux groupes A et B peuvent
également se développer dans ce milieu.
La gélose néomycine additionnée de 5 % de sang de mouton contient une Trypticase Soy
Agar II (TSA II) qui sert de base pour le milieu. Le sang de mouton défibriné fournit
l'enrichissement nécessaire à la croissance des microorganismes exigeants. L'incorporation de
30 µg/mL de néomycine dans ce milieu provoque l'élimination de la flore normale, ce qui
facilite la mise en évidence des streptocoques des groupes A et B.
REACTIFS
BD Neomycin Agar with 5% Sheep Blood
Formule* par litre d'eau purifiée
Digestion pancréatique de
14,5 g
caséine
Digestion papaïque de semoule
5,0
de soja
Chlorure de sodium
5,0
Gélose
14,0
Facteurs de croissance
1,5
Néomycine
0,03
Sang de mouton, défibriné
5%
pH de 7,3 ± 0,2
*Ajustée et/ou complémentée en fonction des critères de performances imposés.
PRECAUTIONS
. A usage professionnel uniquement.
Ne pas utiliser de boîte de Pétri présentant des signes de contamination microbienne,
décoloration, dessiccation ou fissure, ou d'autres signes de détérioration.
Consulter le document MODE D'EMPLOI GENERAL pour plus d'informations concernant les
procédures de manipulation aseptique, les risques biologiques et l'élimination des produits
usagés.
STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION
Dès réception, conserver les boîtes de Pétri dans l’obscurité entre 2 et 8 °C, dans leur
emballage d’origine, jusqu’au moment de leur utilisation. Ne pas les congeler ni les surchauffer.
Les boîtes peuvent être ensemencées jusqu'à la date de péremption indiquée (voir l'étiquette de
l'emballage), et incubées pendant les durées recommandées.
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Des boîtes provenant d’une pile ouverte de 10 boîtes sont utilisables pour une semaine
lorsqu’elles sont conservées entre +2 et +8 °C dans un endroit propre.
CONTROLE DE QUALITE PAR L'UTILISATEUR
Ensemencer des échantillons représentatifs avec les souches suivantes (pour plus de détails,
voir le document MODE D'EMPLOI GENERAL). Incuber les boîtes à 35 ± 2 °C dans une
atmosphère aérobie complémentée en dioxyde de carbone.
Examiner les boîtes de Pétri au bout de 18 à 24 h afin de contrôler la bêta-hémolyse, la
croissance, l'inhibition, la taille des colonies et les réactions hémolytiques.
Souches
Streptococcus pyogenes ATCC 19615
(Groupe A)
Streptococcus agalactiae ATCC 12386
(Groupe B)
Escherichia coli ATCC 25922
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Sans ensemencement
Croissance
Croissance bonne à importante ; colonies de
petite taille avec bêta-hémolyse
Croissance bonne à importante ; colonies de taille
moyenne avec bêta-hémolyse
Inhibition (partielle à) complète
Inhibition partielle à complète, bêta-hémolyse
possible
Rouge (couleur sang)
MÉTHODE
Matériaux fournis
BD Neomycin Agar with 5% Sheep Blood (boîtes de Pétri Stacker de 90 mm). Produits
contrôlés microbiologiquement.
Matériaux non fournis
Milieux de culture auxiliaires, réactifs et matériel de laboratoire requis.
Types d'échantillons
Il est possible d'utiliser ce milieu avec tous les types d'échantillons prélevés sur des patients
susceptibles d'être infectés avec des streptocoques du groupe A (= Streptococcus pyogenes) et
du groupe B (= Streptococcus agalactiae). Les échantillons valables comprennent, mais pas
exclusivement, les écouvillons de gorge, vaginaux ou prélevés sur des nouveau-nés (voir aussi
CARACTERISTIQUES DES PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE).
Mode opératoire du test
Ensemencer l'échantillon sans attendre, dès son arrivée au laboratoire, sur une boîte de Pétri
de BD Neomycin Agar with 5% Sheep Blood, en roulant fermement l'écouvillon sur un tiers
de la surface de la gélose. Strier le reste de la boîte à l'aide d'un ensemenceur à anse stérilisé,
afin d'obtenir des colonies isolées. Sans stériliser à nouveau l'anse, piquer la gélose deux ou
trois fois dans la zone présentant l'ensemencement le plus important. Cette opération
provoque une croissance de sous-surface qui présente les réactions hémolytiques les plus
fiables.
Ensemencer également une boîte de BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood ou de BD
Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood afin de mettre en évidence les
microorganismes d'importance clinique qui risquent d'être inhibés sur le milieu sélectif.
Incuber les boîtes ensemencées à 35 ± 2 °C dans une atmosphère aérobie complémentée en
dioxyde de carbone. Examiner les boîtes au bout de 18 à 24 h et 48 h, si nécessaire.
Résultats
Après 18 à 48 h d'incubation, les streptocoques du groupe A et du groupe B ont formé des
colonies de petite taille (1 à 2 mm), translucides ou opaques, dont la couleur varie du blanc au
gris et qui présentent une zone de bêta-hémolyse en périphérie. Ces colonies sont
généralement de taille plus réduite que le contrôle non sélectif. Si des streptocoques bêtahémolytiques sont présents, les zones ayant été ensemencées par piqûre présentent une bêtahémolyse plus évidente que celle visible en périphérie des colonies.
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Les Neisseria spp., les bâtonnets Gram négatifs et la plupart des staphylocoques bêtahémolytiques sont inhibés. Même si les streptocoques des deux groupes A et B se
développent dans ce milieu, il est possible de les différencier et d'identifier leur appartenance à
l'un ou l'autre de ces groupes au moyen du test de sensibilité à la bacitracine (0,04 unité),
effectué à l'aide de BD Taxo A discs. Pour plus d'informations, consulter le Mode d'emploi
correspondant. Le recours à l'utilisation d'une trousse de groupage des streptocoques ou à un
système d'identification biochimique constituent des méthodes d'identification du groupe de
Lancefield plus fiables.
CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE
La BD Neomycin Agar with 5% Sheep Blood est utilisée pour l'isolement sélectif des
streptocoques des groupes A et B.1,2 Même si ce milieu est sélectif et inhibe généralement les
bâtonnets Gram négatifs, d'autres microorganismes et d'autres streptocoques (p. ex.
Streptococcus mitis) peuvent s'y développer et produire parfois des colonies bêtahémolytiques. Des tests biochimiques ou immunologiques doivent être effectués pour
l'identification finale des isolats.
La BD Neomycin Agar with 5% Sheep Blood est un milieu moins sélectif que la BD Group A
Selective Strep Agar (ssA) en ce qui concerne l'inhibition de la flore normalement présente
dans la gorge. Il est conseillé d'utiliser le milieu ssA lorsque seule la présence de
streptocoques du groupe A est présumée.
REFERENCES
1. Blanchette, L.P., and C. Lawrence. 1967. Group A streptococci screening with neomycin
blood agar. Am. J. Clin. Pathol. 48:411-443.
2. Facklam, R.R., and J.A. Washington II. 1991. Streptococcus and related catalase-negative
gram-positive cocci. In: A. Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and
H.J. Shadomy (ed.), Manual of clinical microbiology, 5th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
CONDITIONNEMENT
BD Neomycin Agar with 5% Sheep Blood
Milieux en boîtes de Pétri prêts à l'emploi, 20 unités par carton
No réf. 254444
INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES
Pour plus d’informations, contacter le représentant local de BD.
BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
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Becton Dickinson France SA
11 rue Aristide Bergès
38800 Le Pont de Claix/France
Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292
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BD, BD logo, Trypticase, Stacker, Taxo and ssA are trademarks of Becton, Dickinson and Company
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2003 Becton, Dickinson and Company
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