FICHE TECHNIQUE
GELOSE DE WILSON BLAIR MODIFIEE
Réf. BK004HA
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D OMAINE D ’ UTILISATION
La gélose de Wilson-blair modifiée est un milieu sélectif utilisé pour l’isolement de Salmonella Typhi et
des autres salmonelles dans les produits pathologiques d’origine animale, les eaux, les produits laitiers et
les autres produits alimentaires.
La gélose de Wilson-Blair modifiée peut être utilisée dans les méthodes normalisées pour la recherche
de Salmonella, comme second milieu d’isolement.
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H ISTORIQUE
En 1926, Wilson et Blair utilisèrent l’association du bismuth et du sulfite de sodium dans un milieu destiné
à l’isolement des Salmonella des groupes Typhi et Paratyphi. Puis en 1956, Hajna et Damon décrivirent
une formule modifiée qui a été recommandée dans la Pharmacopée américaine.
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P RINCIPES
Les concentrations en vert brillant et sulfite de bismuth provoquent l’inhibition de la flore secondaire
à Gram-positif et de la plupart des entérobactéries à l’exception des Salmonella et de quelques
Shigella.
A partir des composés soufrés du milieu, les Salmonella dégagent du sulfure d’hydrogène qui
produit en présence de sulfate ferreux un précipité métallique conférant aux colonies une couleur
noire ou parfois verte.
Il est particulièrement recommandé de réaliser au préalable un enrichissement sur un milieu au
tétrathionate, sur un bouillon au sélénite ou sur un bouillon de Rappaport-Vassiliadis et
d’ensemencer simultanément d’autres milieux moins sélectifs : gélose de MacConkey, gélose XLD
ou gélose Hektoen.
En raison de son pouvoir inhibiteur élevé, ce milieu permet la mise en œuvre d’un inoculum
fortement contaminé.
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P REPARATION
Mettre en suspension 47,0 g de milieu déshydraté (BK004) dans 1
litre d’eau distillée ou déminéralisée.
Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y
maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution.
Ne pas autoclaver.
47 g/L
Ebullition
Fiche technique Gélose de Wilson Blair modifiée
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Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
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M ODE D ’ EMPLOI
Refroidir et maintenir le milieu à 47°C.
Homogénéiser le milieu de façon à disperser le précipité.
Couler en boîtes de Petri stériles à raison de 20 mL par boîte.
Laisser solidifier sur une surface froide.
Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert.
Ensemencer en stries l’inoculum dans les boîtes, à partir des
milieux d’enrichissement utilisés.
Incuber à 37°C pendant 24 et 48 heures.
En surface
Incubation
24 et 48 h à 37°C
NOTE :
Aussitôt après sa préparation, le milieu présente une sélectivité optimale qui diminue graduellement au
cours du temps. C’est la raison pour laquelle il est déconseillé de conserver le milieu prêt-à- l’emploi plus
de 4 jours à 2-8°C.
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L ECTURES
L’aspect des colonies est le suivant :
colonies noires, plates, sèches entourées d’une zone brun noir avec
reflet métallique habituellement présent : Salmonella Typhi.
colonies vertes ou brunâtres sans zones : Salmonella Enteritidis,
Salmonella Gallinarum, Salmonella Choleraesuis, Salmonella
Paratyphi, Shigella.
Les coliformes, les Proteus et les Shigella sont fortement inhibés, mais peuvent parfois donner des
colonies verdâtres ou brunâtres.
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F ORMULE - TYPE
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptone.........................................................................................5,00 g
- Peptone pepsique de viande .........................................................5,00 g
- Extrait de viande ............................................................................5,00 g
- Glucose..........................................................................................5,00 g
- Phosphate disodique .....................................................................4,00 g
- Sulfate ferreux................................................................................0,30 g
- Citrate de bismuth ammoniacal......................................................1,85 g
- Sulfite de sodium ...........................................................................6,15 g
- Vert brillant..................................................................................25,0 mg
- Agar agar bactériologique............................................................14,70 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,6 ± 0,2.
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C ONTROLE QUALITE
Milieu déshydraté : poudre beige à verdâtre, fluide et homogène.
Milieu préparé en boîtes : gélose jaune vert.
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Réponse culturale typique après 48 heures d’incubation à 37°C :
Microorganismes
Salmonella Typhimurium
Salmonella Enteritidis
Shigella sonnei
Enterococcus faecalis
Staphylococcus aureus
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Croissance
bonne, score 2
WDCM 00031
bonne, score 2
WDCM 00030
WDCM 00127 partiellement inhibée,
score 0-1
inhibée, score 0
WDCM 00087
inhibée, score 0
WDCM 00034
Caractéristiques
colonies noires, à reflets métalliques
colonies verdâtres à brunâtres
colonies verdâtres
S TOCKAGE - CONSERVATION
Milieu déshydraté : 2-30°C.
La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
Milieu préparé (à titre indicatif) : 4 jours à 2-8°C
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P RESENTATION
Milieu déshydraté :
Flacon de 500 g
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BK004HA
R EFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Wilson, J.W., and Blair, E.M. 1931. Further experience of the Bismuth Sulphite Media in the isolation of
Bacillus typhosus and Bacillus paratyphosus B from faeces, sewage and water. J. Hyg., 31: 138.
Wilson, J.W. 1938. Isolation of Bact. typhosum by means Bismuth Sulphite Medium in water and milk born
epidemies. J.Hyg., 38: 507-519.
United States Pharmacopeia. Microbial Limit Tests.
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AUTRES INFORMATIONS
Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites
dans ce document.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document
:
Date création
:
Dernière mise à jour :
BK004/F/2001-04 : 6.
04/2001
15/11/2011
Motif de la révision :
Remaniement général
Corrections § 8 : référence WDCM des souches de contrôle
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