Notice utilisateur
Trousse Happy Taq
IVD
Lire attentivement les instructions figurant dans le manuel d’utilisation du ou des
système(s) et sur les étiquetages, et/ou dans la notice d’utilisation du réactif.
RÉF 70977
Contenu
● 50 µl Taq polymérase, prête à l’emploi, 250 unités (5 unités/µl)
● 1 ml tampon de réaction PCR 10x (sans MgCl2), contient du (NH4)2SO4, du
Tris-HCl, du Tween 20
● 1 ml MgCl2 (50 mM)
Spécifications
Enzyme recombinante, ADN-polymérase 5’
3’ thermostable avec activité exonucléase 5’
3’. L’enzyme ne présente aucune activité exonucléase 3’
5’ et insère les nucléotides
(presque exclusivement l’adénosine) à l’extrémité 3’ de l’ADN.
Usage prévu
La Happy Taq a été validée pour être utilisée avec toutes les trousses de marque HISTO TYPE
(BAG Health Care GmbH). Le tampon de réaction PCR et la solution de MgCl2 ne sont pas requis
pour réaliser une PCR SSP avec les trousses HISTO TYPE classiques. La notice utilisateur des
trousses HISTO TYPE contient des informations sur la procédure de test et des indications
complémentaires. Il est possible d’utiliser la trousse Happy Taq pour d’autres tests IVD, mais
l’utilisateur doit la valider pour cet usage.
Conservation et stabilité
La trousse Happy Taq est expédiée sur carboglace. Conserver tous les réactifs de la trousse
Happy Taq à une température ≤ -20 °C après réception. La date de péremption est indiquée
sur l’étiquette de chaque réactif. Elle est également valable une fois les réactifs ouverts. La
date de péremption indiquée sur l’étiquette externe correspond au réactif ayant la validité la
plus courte dans la trousse.
Conditions de sécurité et remarques spécifiques
La trousse Happy Taq doit être utilisée uniquement par du personnel bien formé.
Tous les produits biologiques doivent être manipulés comme des substances potentiellement
infectieuses. Il est recommandé de respecter les précautions de sécurité adaptées pour
manipuler les produits biologiques (ne pas pipeter à la bouche, utiliser des gants jetables pour
manipuler les produits biologiques et pour réaliser le test, se désinfecter les mains une fois le test
terminé). En cas de contact avec la peau, les muqueuses ou les yeux, laver immédiatement
les régions affectées à l’eau ou les rincer avec une solution de lavage oculaire spécifique.
Distribué en Belgique, en France et au Luxembourg par :
médiane diagnostics Z.A. de la Chaîne 78370 PLAISIR +33 1.30.07.50.60 info@mediane-diag.fr
BAG Health Care GmbH
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Les produits biologiques doivent être inactivés avant leur élimination (p.ex. : dans un
autoclave). Les produits jetables doivent être autoclavés ou incinérés après usage. Un
renversement de produits potentiellement infectieux doit être ramassé immédiatement avec
du papier absorbant, et les zones contaminées doivent être nettoyées avec un désinfectant
standard adapté ou avec de l’alcool à 70 %. Les matériels utilisés pour nettoyer les
renversements, y compris les gants, doivent être inactivés avant leur élimination (p.ex. : dans
un autoclave). L’élimination de tous les échantillons et des produits du test doit respecter les
directives en vigueur.
La PCR est un procédé particulièrement sensible, et des conditions spécifiques de sécurité
doivent être respectées pour éviter la contamination et donc les fausses réactions.
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Porter des gants pour manipuler (sans poudre si possible).
Utiliser de nouveaux embouts à chaque étape de pipetage (avec un filtre intégré).
Utiliser des zones de travail séparées pour les tâches avant l’amplification (isolement de
l’ADN et préparation des réactions) et après l’amplification (électrophorèse sur gel,
documentation). De préférence, utiliser deux pièces différentes.
Utiliser les dispositifs et autres matériels uniquement à leur place respective et ne pas les
échanger.
Protocole PCR
Le protocole PCR qui suit est présenté uniquement à titre indicatif. Pour obtenir une
amplification parfaite de la matrice d’ADN, les conditions de test doivent être ajustées et
optimisées pour le thermocycleur utilisé.
Centrifuger chaque flacon de réactif avant utilisation. Il est recommandé de placer les tubes
PCR, obligatoirement exempts de nucléase, sur de la glace avant transfert sur thermocycleur.
Volume
final
25 µl
50 µl
Eau distillée
(stérile, exempte
de nucléase)
Variable
Variable
Tampon de
réaction 10x
2,5 µl
5,0 µl
MgCl2
(50 mM)
dNTP
Amorce
Amorce anti(10 mM) sens (10 µM) sens (10 µM)
0,75 µl
1,5 µl
0,5 µl
1,0 µl
0,5 µl
1,0 µl
0,5 µl
1,0 µl
Matrice ADN
(> 1 µg)
Happy Taq
(5 U/µl)
variable
variable
0,15 µl
0,3 µl
Programmer le thermocycleur selon les spécifications du fabricant.
Étape de programme
Première dénaturation
Dénaturation
Hybridation
Extension
Extension finale
Température
95-96 °C
95 °C
58 °C (50 °C – 68 °C)
72 °C
72 °C
Heure
2 minutes
30 secondes
30 secondes
30 secondes
10 minutes
Nb de cycles
1 cycle
25 – 35 cycles
1 cycle
N.B.: pour les amplicons de plus de 2 kb, il est recommandé d’augmenter la durée de l’extension
(1 min pour 1 kb).
Explication des symboles utilisés sur les emballages
Température de conservation
MgCl2
Solution de Chlorure de magnésium
Utiliser avant
REACTIONBUF│10x
Tampon de réaction, concentré 10x
Consulter la Notice utilisateur
RÉF
Code produit
IVD
Pour usage de diagnostic in vitro
RTU
Prêt à l'emploi
LOT
N° de lot
Polymérase Taq
Taq polymérase
Version : 1/2014. Date de publication : mai 2014
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