cytiva ™ CD34 HSC LNP kit 2 mL Mode d'emploi

Cytiva™ CD34+ HSC LNP kit,
2 mL
Mode d’emploi
Traduit de l’anglais
Introduction
À lire avant de déballer ou d’utiliser le kit
Ces instructions contiennent des informations importantes pour la manipulation, le déballage et la
préparation en toute sécurité du Cytiva™ CD34+ HSC LNP kit, 2 mL.
Avant d’utiliser ce produit, tous les utilisateurs doivent lire le présent document ainsi que le Mode
d’emploi des instruments NanoAssemblr® Ignite™ et Ignite+™.
Utilisation prévue
Le Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL est destiné à la délivrance d'ARN dans des cellules souches hématopoïétiques humaines (CSH) stimulées.
Le kit est fourni comme un produit autonome devant être utilisé uniquement en association avec
l’instrument Ignite ou Ignite+ et les cartouches NxGen™Ignite.
Les produits sont uniquement destinés à la recherche et ne peuvent pas être utilisés dans le cadre de
procédures cliniques ou in vitro, ou à des fins diagnostiques ou thérapeutiques.
Sécurité
Pour une utilisation et une manipulation des produits en toute sécurité, se reporter à la fiche de
données de sécurité (FDS) de chaque produit chimique utilisé dans la procédure.
Scanner le code QR figurant sur l’emballage pour accéder à la FDS des composants.
precisionnanosystems.com
1002516 Rev 1
Généralités
Description
Le Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL est un mélange de réactifs à base de nanoparticules lipidiques
(NPL) qui est optimisé pour la délivrance d’ARN (tel que de l’ARNm de Cas9/ARNsg) dans des CSH
humaines stimulées.
Le kit Cytiva CD34+ HSC LNP inclut des réactifs qui sont utilisés avec l’instrument
NanoAssemblrIgnite ou Ignite+ pour produire des NPL-ARN.
Cette méthode de délivrance non virale peut être intégrée à des flux de travail de culture de CSH
standard. Le kit Cytiva CD34+ HSC LNP permet aux chercheurs d'établir une méthode évolutive et
cliniquement pertinente à l'échelle préclinique pour la délivrance et l’édition de gènes ex vivo. Le kit
est approprié pour être utilisé dans le développement de thérapies à base de CSH modifiées par un
gène.
Applications typiques
• Délivrance d’ARN pour exprimer des protéines d’intérêt
• Délivrance d’ARNm de nucléase à des fins de manipulation génétique, par exemple une invalidation génique par CRISPR/Cas.
• Délivrance d’ARNsi pour une extinction génique transitoire
Produits associés
Les produits suivants peuvent être utilisés avec l’instrument NanoAssemblr Spark™ pour des applications à l’échelle de la découverte et de la recherche.
Produit
Code produit
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 100 μL
1003000
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 100 μL avec cartouches
1004000
Instrument NanoAssemblr Spark
NIS0001
Documentation associée
Document
ID du document
Mode d’emploi du NanoAssemblr Ignite et Ignite+
NIN1134
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Workbook
hsckitmrnaigniteWB-1223
RiboGreen Assay Protocol to Determine RNA Encapsulation Efficiency
PNI-WB-S9-001-INT
Genome Editing of CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells
with Lipid Nanoparticles
HSC-AN-1123
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
2
Accès à la documentation utilisateur en ligne
Scanner le code QR ou consulter l’adresse precisionnanosystems.com/instructions.
Composants du kit
Composants et stockage
Le tableau suivant indique les noms des composants et les températures de stockage pour tous les
composants du kit.
Étiquette
Contenu
Taille
Stockage
Lipid mix
Mélange de lipides
2 ml
-80 °C
Formulation buffer type 1
Tampon de formulation
6 ml
2 °C à 8 °C
Dilution buffer type 1 10X
Tampon de dilution
100 ml
2 °C à 8 °C
Cryopreservation buffer type 2
Tampon de cryoconservation
6 ml
-80 °C
Apolipoprotein-E3 (ApoE3)
Apolipoprotéine-E3 (ApoE3)
500 µg
-80 °C
Date d’expiration
Se reporter à l’emballage des composants individuels.
Capacité du kit
Jusqu’à 5 ml de formulation de nanoparticules lipidiques, ou environ 1 mg d’ARN chargé. Par
exemple :
• 5 x 1 ml de NPL
• 1 x 5 ml de NPL
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
3
Matériel requis
Matériel requis fourni par Precision NanoSystems
Produit
Code produit
Instrument NanoAssemblrIgnite ou Ignite+
Ignite : NIS0001
Ignite+ : 1001413
Cartouches NanoAssemblr NxGen Ignite
Paquet de 100 : NIN0061
Paquet de 200 : NIN0062
Matériel requis fourni par l’utilisateur
Pour préparer les NPL-ARN avec le kit Cytiva CD34+ HSC LNP, l’équipement, les consommables et les
réactifs suivants sont requis.
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Lecteur de plaques en fluorescence
Bloc chauffant ou étuve capable de chauffer à 55 °C
Étuve, capable de chauffer à 37 °C
Spectromètre UV
Agitateur vortex
Centrifugeuse réfrigérée avec rotor oscillant
Tubes à centrifuger coniques - 15 et 50 ml
Tubes de 0,5 à 2 ml avec capuchon à vis et joint torique
Seringue jetable - 1, 3, 5 ou 10 ml
Micropipettes et cônes de pipette exempts de RNase - 10, 20, 200 et 1000 µl
Aiguilles émoussées
Filtres à seringue - 13 mm, 0,2 µm, polyéthersulfone (PES)
Filtres à centrifuger à seuil de coupure (MWCO) de 30 kDa Amicon®, 15 ml
Remarque :
•
•
•
•
•
•
•
Un filtre à centrifuger par volume de 1,5 ml de NPL non diluées (45 ml diluées)
est recommandé. L’utilisation de filtres supplémentaires ne réduit pas la
récupération mais permet de gagner du temps pour le traitement en aval.
Plaques à 96 puits à fond noir
Quant-iTRiboGreen Assay Kit
Triton X-100
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS) 1X, sans calcium et magnésium
Eau de qualité biologie moléculaire (exempte de RNase/DNase et d’endotoxines)
Isopropanol à 70 %
Solution de décontamination des RNases
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
4
Vue d’ensemble du flux de travail
Cette section décrit le flux de travail pour préparer des NPL-ARN sur l’instrument Ignite et Ignite+, y
compris la préparation de la solution d’ARN, la manipulation de l’instrument et la préparation des
NPL. Un flux de travail typique utilisant un kit Cytiva CD34+ HSC LNP kit est indiqué dans le tableau cidessous.
Phase
Action
Description
1
Remplissage du Cytiva CD34+
HSC LNP kit, 2 mL Workbook
Calculer la consommation en réactifs et préparer
le matériel
2
Préparation de l’espace de travail
et des réactifs dans une enceinte
de sécurité biologique
Décongeler les réactifs et les matériels, étiqueter
les flacons et paramétrer l’instrument
3
Préparation de la solution d’ARN
Préparer la solution de travail d’ARN en combinant
la charge utile d’ARN et le tampon de formulation
inclus
4
Formulation des NPL-ARN
Formuler les NPL sur l’instrument
5
Traitement en aval des NPL
Nettoyer la formulation par un échange de
tampon en utilisant un filtres à centrifuger à seuil
de coupure (MWCO)
6
Quantification de l’ARN chargé
Quantifier l’ARN encapsulé à l’aide de l’essai RiboGreen
7
Traitement des CSH par les NPL
Ajouter les NPL-ARN aux cellules
Remplissage de la feuille de calcul
Le Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Workbook est un outil permettant de calculer les paramètres et
les volumes pour la formulation des NPL sur l’instrument Ignite et Ignite+.
Le Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Workbook est également appelé Feuille de calcul dans le présent
document. La Feuille de calcul est disponible sur Internet. Voir Accès à la documentation utilisateur
en ligne, à la page 3.
La feuille de calcul est divisée en deux sections pour tenir compte des deux applications indiquées cidessous, et l’utilisateur doit uniquement remplir les entrées sous l’en-tête de section pertinent :
1
2
1. Pour l’expression d’ARNm
2. Pour l’édition par CRISPRCas9 (avec l’ARNm de Cas9 et un ARNsg)
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
5
À l’étape 1, l’utilisateur doit saisir les valeurs des paramètres indiqués ci-dessous. Les valeurs recommandées pour ces paramètres sont indiquées dans le tableau.
Paramètre
Description
Valeur recommandée
Total LNP volume (mL)
Volume de la formulation de
NPL résultant de la procédure
Supérieure à 0,5 ml
Stock mRNA
concentration (mg/
mL)1
Concentration de la solution
mère d’ARNm
Déterminée par l’utilisateur
Stock Cas9 mRNA
concentration (mg/
mL)2
Concentration de la solution
mère d’ARNm de Cas9
Déterminée par l’utilisateur
Stock sgRNA
concentration (mg/
mL)2
Concentration de la solution
mère d’ARNsg
Déterminée par l’utilisateur
Cas9 to sgRNA ratio
(wt.)2
Rapport en poids de l’ARNm
de Cas9 sur l’ARNsg
1:1
Samples (number of
replicate LNPs)
Nombre de réplicats
d’échantillons de NPL
Déterminée par l’utilisateur
Remarque :
Une concentration mère
d’ARNsg couramment utilisée
est de 100 µM ou approximativement 3,2 mg/ml pour les
produits de recombinaison de
synthèse.
1 Pour l’expression d’ARNm uniquement
2 Pour l'édition par CRISPRCas9 uniquement
Les calculs optimisés présentés dans la Feuille de calcul utilisent un débit total de 12 ml/min, un
rapport de débit de 2:1, et un volume de déchets de départ de 10 %.
Préparation de l’espace de travail et des
réactifs
Il est important de maintenir la stérilité de l’ensemble du matériel et d’effectuer tous les travaux dans
l’enceinte de sécurité biologique (ESB). Les cellules souches hématopoïétiques sont particulièrement sensibles aux pyrogènes, tels que les endotoxines, et ce même à des taux minimalement
détectables.
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
6
Suivre les étapes ci-dessous pour préparer l’espace de travail et les réactifs.
Étape
Action
1
Mettre sous tension et nettoyer l’ESB en l’essuyant avec de l’isopropanol à 70 % et une
solution de décontamination des RNases.
2
Récupérer l’aliquote ou les aliquotes d’ARN congelée(s) puis la/les décongeler sur de la
glace. Toujours conserver l’ARN sur de la glace afin d’empêcher toute dégradation du
matériel.
3
Décongeler le mélange de lipides à 55 °C pendant 5 minutes dans un bain à billes ou un
bloc chauffant. Après la décongélation, conserver le mélange de lipides à température
ambiante dans l’ESB. Conserver le flacon fermé pour empêcher toute évaporation.
4
Agiter le mélange de lipides au vortex pour garantir une parfaite homogénéité. Centrifuger dans une microcentrifugeuse pendant 3 à 5 secondes.
5
Placer les éléments suivants dans l’ESB :
Sur de la glace :
À température ambiante :
• Aliquote(s)
• Un tube conique de 15 ml pour chaque échantillon de NPL et
d’ARN
un tube supplémentaire pour les déchets
• Les composants du kit : mélange de lipides, tampon de
formulation et tampon de dilution
• Quatre tubes pour chaque échantillon de NPL, dimensionnés
et étiquetés de manière appropriée pour le matériel suivant :
- Solution d’ARN : un tube pour la solution aqueuse d’ARN
(1 à 15 ml)
- Échantillon concentré : un tube de collecte pour l’échantillon de NPL-ARN, avant la filtration à 0,2 μm (1 à 15 ml)
- Échantillon RiboGreen : un tube de collecte pour une
petite aliquote de NPL-ARN afin de réaliser l’essai RiboGreen (~20 à 25 μL)
- Échantillon final : un tube de collecte pour l’échantillon de
NPL-ARN, pour les NPL-ARN restantes pour la culture
cellulaire après la filtration à 0,2 μm (1 à 15 ml)
• Micropipettes de 200 μl et 1 ml et cônes de pipette stériles
• Filtres à centrifuger à seuil de coupure (MWCO)
• Seringues, aiguilles et filtres de 0,2 µm
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
7
Étape
Action
6
Préparer le tampon de dilution 1X dans un tube en fonction des volumes du tampon de
dilution 10X (1) et de l’eau de qualité biologie moléculaire (2) indiqués à l’étape 2 de la
Feuille de calcul.
1
2
7
Dans l’ESB, préparer les filtres à seuil de coupure (MWCO) de la manière suivante :
a. Rincer les filtres avec de l’isopropanol à 70 %.
b. Centrifuger environ 15 ml d’eau de qualité biologie moléculaire ultra-pure à travers le
filtre à 4000 x g pendant 5 minutes.
Remarque :
La centrifugation à l’eau élimine les conservateurs de la membrane et permet de s’assurer de l'intégrité de la membrane. Si l’eau traverse complètement le filtre, il est
possible que la membrane soit compromise ; le filtre doit alors être jeté.
Préparation de la solution d’ARN
Introduction
Cette section décrit la procédure de préparation de la solution d’ARN. Il existe deux procédures différentes en fonction du type d’ARN. Toutes les étapes doivent être réalisées dans une ESB afin de minimiser la contamination bactérienne et toute croissance potentielle dans les solutions.
Avant de commencer, mesurer la concentration de la ou des solution(s) mère d’ARN par UV-Vis afin
de s’assurer que la concentration est bien celle prévue.
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
8
Préparation d’ARNm pour une délivrance à un seul
composant
Étape
Action
1
Pipeter les volumes de tampon de formulation (1) et d’eau de qualité biologie moléculaire (2) indiqués à l’étape 3 de la Feuille de calcul dans un tube pour la solution d’ARN.
1
2
3
2
Bien mélanger.
3
Pipeter les volumes d’ARNm (3) indiqués à l’étape 3 de la Feuille de calcul dans le tube de
solution d’ARN.
Conserver la solution mère d’ARN sur de la glace jusqu’à utilisation.
Préparation d’ARNm pour une délivrance à deux
composants
Étape
Action
1
Pipeter les volumes de tampon de formulation (1) et d’eau de qualité biologie moléculaire (2) indiqués à l’étape 3 de la Feuille de calcul dans un tube pour la solution d’ARN.
1
2
3
4
2
Bien mélanger.
3
Pipeter les volumes d’ARNm de Cas9 (3) et d’ARNsg (4) indiqués à l’étape 3 de la Feuille
de calcul dans le tube de solution d’ARN.
Conserver la solution mère d’ARN sur de la glace jusqu’à utilisation.
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
9
Formulation de NPL-ARN
Suivre les étapes ci-dessous pour formuler les NPL-ARN sur l’instrument Ignite et Ignite+.
Étape
Action
1
Mettre l’instrument sous tension comme décrit dans son Mode d’emploi.
2
Dans le menu principal, appuyer sur Quick Run (Cycle rapide).
3
Saisir les paramètres calculés indiqués à l’étape 5 de la Feuille de calcul. Se reporter au
Mode d’emploi de l’instrument pour plus de détails.
4
Insérer la cartouche NxGen dans l’instrument.
5
Préparer la seringue R avec le mélange de lipides :
a. Choisir la taille de seringue selon le volume spécifié pour la seringue R à l’étape 5 de la
Feuille de calcul.
b. Aspirer la quantité de mélange de lipides requise dans la seringue en utilisant une
aiguille émoussée propre.
c. Retirer l’aiguille de la seringue, et tapoter la seringue pour éliminer les éventuelles
bulles d’air.
d. À l’aide du piston, pousser le liquide dans la seringue en veillant à éviter tout écoulement au niveau de la pointe de la seringue.
6
Préparer la seringue C avec la solution aqueuse :
a. Choisir la taille de seringue selon le volume spécifié pour la seringue C à l’étape 5 de la
Feuille de calcul.
b. À partir du tube de solution d’ARN, aspirer la totalité de la solution dans la seringue en
utilisant une aiguille émoussée propre.
c. Vérifier que le volume approprié est présent dans la seringue C.
d. En laissant l’aiguille en place, tapoter la seringue pour éliminer les éventuelles bulles
d’air.
e. À l’aide du piston, pousser le liquide dans la seringue en veillant à éviter tout écoulement au niveau de la pointe de la seringue.
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
10
Étape
Action
7
Continuer à raccorder les seringues et commencer la procédure de formulation sur l’instrument comme décrit dans son Mode d’emploi.
Traitement en aval des NPL
Une fois la formulation sur l’instrument terminée, suivre les étapes ci-dessous pour traiter les NPL en
aval et facultativement préparer l’échantillon final pour un stockage de longue durée à -80 °C.
Étape
Action
1
Effectuer une dilution 30X des NPL-ARN avec un tampon de dilution 1X dans l’ESB.
2
Remplir le ou les filtres à centrifuger à seuil de coupure (MWCO) avec les NPL-ARN
diluées, comme calculé à l’étape 6.
3
Centrifuger à 4000 x g pendant 10 minutes à 4 °C dans un rotor à godets oscillants.
Remarque :
Des vitesses moins élevées sont acceptables mais augmentent le temps de traitement.
4
Jeter la solution se trouvant en dessous de l’unité de filtration et répéter l’étape 3 si
nécessaire jusqu’à ce que la totalité de l’échantillon soit reconcentrée à environ le
volume de NPL-ARN de départ.
5
Dans l’ESB, récupérer l’échantillon contenu dans le filtre à l’aide d’une micropipette.
6
Laver la membrane du filtre à centrifuger à seuil de coupure (MWCO) avec environ
100 à 200 µl de tampon de dilution 1X pour augmenter la récupération des NPL-ARN.
7
Pipeter l’échantillon dans un tube exempt de RNase.
8
Facultatif. Préparer les NPL-ARN pour un stockage de longue durée :
a. Diluer des aliquotes des NPL à 1:1 avec le tampon de cryoconservation inclus dans le
kit.
b. Mélanger minutieusement les NPL avec le tampon en pipetant de haut en bas à cinq
reprises au minimum.
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
11
Étape
Action
9
Dans l’ESB, filtrer l'échantillon concentré en plaçant un filtre stérile de 0,2 µm dans le
tube de l’échantillon final.
Astuce :
Pour maximiser la récupération des NPL :
a. Humidifier le filtre avec de petites quantités de tampon de dilution 1X (conservé dans
une seringue distincte).
b. Filtrer l’échantillon de NPL.
c. Filtrer à nouveau 100 à 200 µl de tampon de dilution 1X après la collecte de l’échantillon de NPL.
d. Enfin, introduire de l’air dans le filtre à deux ou trois reprises pour garantir la collecte
de toutes les NPL résiduelles.
Remarque :
L’utilisation de plusieurs filtres de 0,2 µm peut être nécessaire pour des volumes d'échantillon plus importants. L’utilisation de plusieurs filtres ne devrait avoir aucun impact sur le
rendement en NPL-ARN.
10
Aliquoter 25 µl de NPL-ARN dans le tube pour l’échantillon RiboGreen.
11
Déterminer la concentration en ARN des NPL à l’aide de l’essai RiboGreen. Se reporter au
RiboGreen Assay Protocol to Determine RNA Encapsulation Efficiency , disponible sur
Internet, pour obtenir des instructions détaillées. Voir Accès à la documentation utilisateur en ligne, à la page 3.
12
Facultatif : mesurer la taille des particules par diffusion dynamique de la lumière (DLS).
Les NPL-ARN sont désormais prêtes à être utilisées. Pour un stockage de courte durée, conserver
l’échantillon à 4 °C et l’utiliser pour le traitement cellulaire dans un délai d’une (1) semaine au
maximum. Pour un stockage de longue durée, conserver les NPL-ARN formulées dans le tampon de
cryoconservation à -80 °C pendant un mois au maximum.
Remarque :
Toute conservation pendant plus d’un mois nécessite de procéder à des tests.
Traitement des CSH par les NPL
Vue d’ensemble
L’illustration ci-dessous représente un schéma fonctionnel du flux de travail de la culture cellulaire
des CSH et du traitement par les NPL. Les moments temporels suggérés dans le flux de travail sont
basés sur des modèles expérimentaux d’invalidation de CD45 et CD33. Se reporter au document
Genome Editing of CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells with Lipid Nanoparticles pour
plus de détails.
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
12
Purification et stimulation
Traitement par
les NPL pour
l’édition
génique
Ensemencement d’UFC
Détection de
l’invalidation
Comptage des
UFC
Jour ~3-5
Jour 8
14 jours après
l’ensemencement
LNPs
CD34+ cells
Jour 0
Jour 1
Recommandations pour la culture cellulaire
Pour obtenir une efficacité de transfection optimale des NPL, tenir compte des paramètres essentiels suivants :
• Dosage des NPL-ARN : il est recommandé d’effectuer une titration complète de la dose pour
chaque charge utile afin d’identifier la dose optimale. Une charge utile peut être, par exemple, une
construction d’ARN guide unique différente. La plage recommandée pour la dose de titration peut
aller de 0,2 à 20 µg d’ARN total par million de cellules traitées.
• Pratique stérile : maintenir un environnement de travail stérile lors de la manipulation des
cellules et des NPL. Les opérateurs doivent être dûment formés à la technique stérile appropriée
avant de travailler dans l’enceinte de sécurité biologique.
• Décongélation et expansion des cellules : les CSH CD34+ cryoconservées doivent être stimulées pendant 24 heures après la décongélation (avant l’ajout des NPL).
• Densité cellulaire : une densité d’ensemencement de 0,1 à 0,5 million de cellules/ml est recommandée pour le traitement des NPL.
• Temps de traitement des NPL : le temps d’incubation après la transfection des NPL dépend des
caractéristiques de la charge utile d’ARN, par exemple de la cinétique d’expression et de la stabilité. Un traitement de 24 à 96 heures est recommandé, avec une optimisation supplémentaire si
nécessaire.
• Milieux de culture cellulaire : le kit Cytiva CD34+ HSC LNP montre une performance optimale
dans des milieux exempts de sérum. Un milieu de culture cellulaire contenant une faible concentration de sérum (≤ 1 %) au moment de l'ajout des NPL peut être acceptable, mais doit être validé
de manière expérimentale. En outre, l’utilisation d'un milieu exempt de sérum est recommandée
pour une rétention optimale du caractère souche et d’un phénotype greffable (CD34+ CD38CD90+ CD133+).
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
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Procédure de traitement par des NPL
Les étapes ci-dessous offrent une vue d’ensemble de la procédure de traitement par des NPL. Se
reporter au document Genome Editing of CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells with Lipid
Nanoparticles pour obtenir un exemple de flux de travail détaillé, qui a été optimisé pour le traitement de CSH par des NPL, ainsi que des conseils pour la résolution des problèmes. Voir la Documentation associée, à la page 2.
Étape
Action
1
Décongeler ou isoler les CSH CD34+.
2
Diluer les cellules à 0,1 à 0,5 million de cellules/ml dans un milieu de culture cellulaire.
3
Le jour suivant, juste avant le traitement par les NPL, ajouter de l’ApoE aux cellules de la
manière suivante :
a. Préparer une solution mère d’ApoE à 0,1 mg/ml en diluant les 500 µg d’ApoE inclus
avec 5 ml de PBS 1X sans calcium ou magnésium. Conserver en aliquotes à -80 °C
pendant 2 mois au maximum pour éviter les cycles de congélation/décongélation.
b. Ajouter la solution mère d’ApoE aux cellules pour obtenir une concentration finale de
1 µg/ml (dilution à 1:100 de la solution mère à 0,1 mg/ml).
c. Mélanger minutieusement par trituration.
4
Ensemencer les cellules dans un récipient de culture ou une plaque multipuits.
5
Ajouter les NPL formulées directement aux cellules ensemencées.
6
Incuber à 37 °C dans du CO2 à 5 %.
7
Effectuer une analyse en aval pour évaluer l’efficacité de la transfection, par exemple via
une cytométrie en flux ou un essai d’unités formant colonies.
Informations de commande
Pour obtenir les informations les plus récentes, consulter le site precisionnanosystems.com.
Nom
Code produit
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL
1005000
Instrument NanoAssemblr Ignite
NIN0001
Instrument NanoAssemblr Ignite+
1001413
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 100 μL
1003000
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 100 μL avec cartouches
1004000
Cartouches NanoAssemblr NxGen Ignite - paquet de 100
NIN0061
Cartouches NanoAssemblr NxGen Ignite - paquet de 200
NIN0062
Cytiva CD34+ HSC LNP kit, 2 mL Mode d’emploi 1002516 Rev 1
14
Page laissée intentionnellement vide
Page laissée intentionnellement vide
precisionnanosystems.com
Ignite, Ignite+, NanoAssemblr, NxGen et Spark sont des marques de commerce de Precision NanoSystems.
Cytiva est une marque de commerce de Life Sciences IP Holdings Corporation ou de l’une de ses sociétés affiliées opérant sous le
nom de Cytiva.
Amicon est une marque de commerce de Merck KGaA. Triton est une marque de commerce de Union Carbide Corporation.
RiboGreen et Quant-iT sont des marques de commerce de Thermo Fisher Scientific.
Toute autre marque commerciale tierce est la propriété de son détenteur respectif.
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Pour les coordonnées des bureaux locaux, visiter le site precisionnanosystems.com
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