Cytiva™ RNA delivery LNP kit Mode d’emploi Traduit de l’anglais Introduction À lire avant de déballer ou d’utiliser le kit Ces instructions contiennent des informations importantes pour la manipulation, le déballage et la préparation en toute sécurité du kit Cytiva™ RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml. Avant d’utiliser ce produit, tous les utilisateurs doivent lire le présent document ainsi que le Mode d’emploi des instruments NanoAssemblr™ Ignite™ et Ignite+™. Utilisation prévue Le kit Cytiva RNA delivery LNP kit est uniquement destiné à la recherche relative aux vaccins à ARN. Il s'agit d'un produit autonome et doit être uniquement utilisé avec l’instrument Ignite ou Ignite+ et les cartouches NxGen™Ignite. Ce produit est uniquement destiné à la recherche et ne doit pas être utilisé dans le cadre de procédures cliniques ou in vitro, ou à des fins diagnostiques ou thérapeutiques. Sécurité Pour une utilisation et une manipulation des produits en toute sécurité, se reporter à la fiche de données de sécurité (FDS) de chaque produit chimique utilisé dans la procédure. Scanner le code QR figurant sur l’emballage pour accéder à la FDS des composants. cytiva.com 29798795 AA Généralités Description Le kit Cytiva RNA delivery LNP est un mélange de réactifs à base de nanoparticules lipidiques (NPL), qui est optimisé pour l'administration d’ARN dans des essais précliniques de vaccins utilisant des modèles de petits rongeurs. Il est disponible en deux volumes : 3 ml et 6 ml. Le kit Cytiva RNA delivery LNP inclut un mélange de lipides ionisables et tous les réactifs nécessaires pour préparer les NPL sur l'instrument NanoAssemblr Ignite ou Ignite+. Applications typiques • Administration in vivo d’ARNm et de pARNa au cours d’essais précliniques de vaccins • Analyse in vitro de la charge d’ARN Ressources en ligne pour l’utilisateur L’utilisateur peut télécharger les ressources sur les produits suivants depuis Internet. • Cytiva RNA delivery LNP kit Workbook • RiboGreen Assay Protocol to Determine RNA Encapsulation Efficiency Pour obtenir les fichiers des documents, effectuer une recherche par titre de document sur le site cytiva.com. Documentation de l’utilisateur La documentation de l’utilisateur est répertoriée dans le tableau ci-dessous. Documentation Contenu principal Mode d'emploi des instruments NanoAssemblr Ignite et Ignite+ (NIN1134) Instructions nécessaires à la préparation et à l’exploitation correcte et en toute sécurité de l’instrument Ignite ou Ignite+ Dans le présent document, ce document est appelé Mode d’emploi de l'instrument. Vue d’ensemble du système, exigences relatives au site et instructions relatives au déplacement du système à l’intérieur d’un bâtiment Instructions pour la maintenance et le dépannage de base 2 Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Accès à la documentation utilisateur en ligne Scanner le code QR ou visiter le site cytiva.com/instructions. Saisir le titre ou le numéro de document pour accéder au fichier. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA 3 Composants du kit Composants et stockage Le tableau suivant indique les noms des composants et les températures de stockage pour tous les composants du kit. Étiquette Contenu Taille Stockage Lipid mix Mélange de lipides 3 ml -80 °C 6 ml Formulation buffer Tampon de formulation 6 ml 2 °C à 8 °C Tampon de dilution 100 ml 2 °C à 8 °C Tampon de cryoconservation 12 ml -80 °C type 1 Dilution buffer type 1 10X Cryopreservation buffer type 1 Remarque : Tous les éléments du kit sont expédiés dans de la glace sèche et peuvent arriver sur site congelés. Avant de les utiliser, s'assurer que les tampons sont entièrement décongelés et qu'ils ont été resolubilisés à l’aide d’un agitateur vortex pendant 30 secondes. Date d’expiration Voir les différents éléments. Capacité du kit Pour un rapport N/P1 de 8, les kits permettent la formulation des quantités d’ARN suivantes : Kit Volume de formulation Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml ~0,7 mg d’ARN Cytiva RNA delivery LNP kit, 6 ml ~1,5 mg d’ARN Quand un volume total de 2 ml de NPL est préparé avec un rapport de débit (FRR) de 3:1 et un rapport N/P de 8, la récupération d’ARN prévue dans l'échantillon final est de 70 % à 80 %. 1 4 Le rapport N/P correspond au rapport molaire des amines (azote) dans les groupes ionisables lipidesphosphates de l'acide nucléique. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Si le rapport N/P pour la formulation des NPL est inférieur, la récupération d’ARN est proportionnellement supérieure. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA 5 Matériel requis Matériel requis fourni par Cytiva • Instrument NanoAssemblr Ignite ou Ignite+ • Cartouches NanoAssemblr Ignite ou Ignite+ Voir la section Recherche des informations de commande sur Internet, à la page 22 pour plus d’informations. Matériel requis fourni par l’utilisateur Le matériel suivant est nécessaire pour préparer les NPL-ARN avec le présent kit. Tous les consommables en plastique utilisés pendant la préparation, la formulation et le stockage des NPL doivent être stériles et sans RNase, selon le cas. • Lecteur de plaques en fluorescence • Bloc chauffant ou étuve capable de chauffer à 55 °C • Spectromètre UV • Agitateur vortex • Centrifugeuse réfrigérée avec rotor oscillant • Tubes de centrifugation coniques : 15 ml et 50 ml • Tubes de 0,5 à 2 ml avec capuchon à vis et joint torique • Seringue jetable : 1 ml, 3 ml, 5 ml ou 10 ml Remarque : Voir le Mode d'emploi de l'instrument pour connaître les marques et les tailles de seringue à utiliser en fonction des paramètres de formulation. Il est recommandé d’utiliser la plus petite taille de seringue possible pouvant recueillir le volume requis. • Micropipettes et cônes de pipette • Pipeteur et pipettes sérologiques • Aiguilles émoussées • Filtres de seringue stériles : 13 mm, 0,2 µm, polyéthersulfone (PES) • Filtres de centrifugation Amicon® à seuil de coupure (MWCO) de 30 kDa, 15 ml • Plaques à 96 puits à fond noir, surface non traitée • Quant-iT RiboGreen Assay Kit • Triton X-100 • Eau de qualité biologie moléculaire • Isopropanol à 70 % 6 Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA • Solution de décontamination des RNases Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA 7 Vue d’ensemble du flux de travail Cette section décrit le flux de travail de préparation des NPL-ARN sur les instruments Ignite et Ignite+, y compris la préparation de la solution d’ARN, la manipulation de l’instrument et la préparation des NPL. Le tableau ci-dessous présente un flux de travail type utilisant un kit Cytiva RNA delivery LNP kit. Étape Action Description 1 Remplissage de la feuille de calcul Cytiva RNA delivery LNP Workbook Calcul de la consommation en réactifs et préparation du matériel 2 Préparation de l’espace de travail et des réactifs Décongélation et préparation des réactifs, qui doivent avoir les concentrations requises 3 Préparation de la solution d’ARN Préparation de la solution d’ARN en combinant la charge d’ARN avec le tampon de formulation et l’eau de qualité biologie moléculaire inclus 4 Formulation de NPLARN Formulation des NPL sur l’instrument 5 Traitement en aval des NPL • Échange de tampon et concentration des NPL à l'aide de filtres de centrifugation • Ajout du tampon de cryoconservation • Filtration stérile 6 Détermination des caractéristiques physicochimiques des NPL • Détermination de la taille et de la polydispersité des NPL par diffusion dynamique de la lumière (DLS) ou toute autre méthode équivalente • Quantification de l’ARN encapsulé en s’appuyant sur l’essai RiboGreen 7 8 Dilution pour atteindre la concentration voulue Dilution des NPL-ARN à la concentration voulue en fonction de la concentration de l’ARN encapsulé Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Remplissage de la feuille de calcul L'outil Cytiva RNA delivery LNP kit Workbook permet de calculer les paramètres et les volumes pour la formulation des NPL sur les instruments Ignite et Ignite+. L'outil Cytiva RNA delivery LNP kit Workbook est également appelé Feuille de calcul dans le présent document. Cette Feuille de calcul est disponible sur Internet. Voir la section Ressources en ligne pour l’utilisateur, à la page 2. Dans Step 1: User Input (Étape 1 : saisie de l'utilisateur), l’utilisateur doit saisir les valeurs des paramètres indiqués dans le tableau ci-dessous. Des valeurs recommandées sont également mentionnées pour les paramètres concernés. Paramètre Description Valeur recommandée Total flow rate (mL/min) Sommes des débits des canaux C et R avant la dilution en ligne facultative 20 ml/min Total LNP volume (mL) Volume total de NPL préparé, y compris les déchets Déterminé par l’utilisateur Remarque : Cette valeur n’inclut pas le volume ajouté par la dilution en ligne. RNA stock concentration (mg/mL) Concentration de la solution mère d’ARN Mesurée par UV-vis Lipid mix working concentration (ratio of stock concentration) Concentration du mélange de lipides utilisé pendant la procédure par rapport au mélange de lipides fourni dans le kit 1 In-line dilution ratio Dil:LNP (X:1) Ratio de dilution diluant:NPL, si une dilution en ligne est effectuée 2 Flow rate ratio Aq:Lipid (X:1) Ratio des volumes des liquides des seringues C et R Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Remarque : Laisser vide ou saisir N/A si ce paramètre est sans objet. 3 9 Paramètre Description Valeur recommandée N/P ratio Rapport molaire des amines (azote) dans les groupes ionisables lipides-phosphates de l'acide nucléique 8 Lipid mix excess (mL) Volume de mélange de lipides préparé en plus du volume nécessaire pour compenser les pertes lors des transferts Déterminé par l’utilisateur RNA solution excess (mL) Volume de solution d’ARN préparé en plus du volume nécessaire pour compenser les pertes lors des transferts Déterminé par l’utilisateur Start waste (mL) Volume de liquide devant être récupéré dans le tube de récupération des déchets au début du cycle Voir le Mode d'emploi de l'instrument pour connaître les volumes de déchets recommandés en fonction des tailles de seringue utilisées. End waste (mL) Volume de liquide devant être récupéré dans le tube de récupération des déchets à la fin du cycle Voir le Mode d'emploi de l'instrument pour connaître les volumes de déchets recommandés en fonction des tailles de seringue utilisées. Remarque : Pour des structures d’ARN plus complexes et de plus grande taille, il est recommandé d’utiliser les paramètres de formulation et de procédé suivants pour produire des NPL de plus petite taille, avec un indice de polydispersité (PDI) plus faible et une meilleure encapsulation de l’ARN : • rapport N/P de 8, • rapport de débit (FRR) de 5, • concentration du mélange de lipides de 0,5X. 10 Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Préparation de l’espace de travail et des réactifs Suivre les étapes ci-dessous pour préparer l’espace de travail et les réactifs. Pour maintenir les réactifs stériles, réaliser toutes les étapes à l’intérieur de l'armoire de biosécurité (ESB) et utiliser du matériel de laboratoire stérile en plastique. Étape Action 1 Mettre l’ESB en marche et la nettoyer avec une solution de décontamination des RNases puis de l’isopropanol à 70 %. 2 Décongeler le tube de lipides à 55 °C pendant 5 minutes dans un bain à billes ou un bloc chauffant. Maintenir le tube fermé pour éviter toute évaporation quand la température du mélange de lipides est supérieure à la température ambiante. 3 Une fois le mélange de lipides décongelé, transférer le tube sur un agitateur vortex à température ambiante. Remarque : Après la décongélation du mélange de lipides, il est recommandé de le répartir, en parts aliquotes, dans des récipients de plus petit volume. Cela permet de maintenir le mélange de lipides stérile et de réduire le nombre de cycles de congélation-décongélation. 4 Placer les éléments suivants dans l’ESB. • Les composants du kit : mélange de lipides, tampon de formulation, tampon de dilution, tampon de cryoconservation • Eau de qualité biologie moléculaire • Tubes stériles d’un volume adéquat pour la préparation des solutions à la concentration requise : - Tampon de dilution - Tampon de cryoconservation 2X - Tampon de cryoconservation 1X - Solution d’ARN - Mélange de lipides • Tubes stériles étiquetés pour les échantillons suivants : - Échantillon concentré : un tube de collecte pour l’échantillon de NPLARN, avant la filtration stérile Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA 11 Étape Action - Échantillon de cryoconservation : un tube de collecte pour diluer l’échantillon de NPL-ARN avec le tampon de cryoconservation avant la filtration stérile - Échantillon stérile : un tube de collecte pour l’échantillon de NPL-ARN final après la filtration stérile - Échantillon à analyser : un tube de collecte pour la répartition en parts aliquotes d’un petit volume de NPL en vue d’une diffusion dynamique de la lumière (DLS) et d’un essai RiboGreen Remarque : Le volume et le nombre de chaque type de tube dépend des paramètres de formulation. • Micropipettes de 20 μl, 200 μl et 1 ml et cônes de pipette sans RNase • Pipettes sérologiques sans RNase (du volume requis et dans la quantité nécessaire) et pipeteur • Seringues, aiguilles et filtres de 0,2 µm • Éthanol, si nécessaire 5 Préparer le tampon de dilution 1X dans un tube stérile : a. Saisir le volume final de tampon de dilution 1X requis dans l’étape 2 de la Feuille de calcul. b. Diluer le tampon de dilution 10X fourni dans le kit avec de l’eau de qualité biologie moléculaire en respectant les volumes indiqués à l’étape 2. 6 Préparer le tampon de cryoconservation 2X dans un tube stérile : a. Saisir le volume final de tampon de cryoconservation 2X requis dans l’étape 3 de la Feuille de calcul. 12 Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Étape Action b. Diluer le tampon de cryoconservation 5X fourni dans le kit avec de l’eau de qualité biologie moléculaire en respectant les volumes indiqués à l’étape 3. 7 Préparer le tampon de cryoconservation 1X dans un tube stérile : a. Saisir le volume final de tampon de cryoconservation 1X requis dans l’étape 4 de la Feuille de calcul. b. Diluer le tampon de cryoconservation 5X fourni dans le kit avec de l’eau de qualité biologie moléculaire en respectant les volumes indiqués à l’étape 4. Astuce : Pour un calcul précis du volume, patienter et effectuer cette opération à l'étape précédant le début de la procédure de dilution décrite à la section Dilution à la concentration voulue, à la page 21. 8 Préparer le mélange de lipides comme suit : a. Veiller à ce que le mélange de lipides refroidisse à température ambiante. b. Mélanger le contenu du tube avec un agitateur vortex pour s'assurer que le mélange des lipides est homogène. c. Ajouter le volume requis de mélange de lipides (1) dans un tube stérile d’une taille adaptée, comme indiqué à l’étape 5 de la Feuille de calcul. Si une dilution doit être exécutée, ajouter le volume d’éthanol (2) dans le tube et mélanger minutieusement par pipetage. 1 2 Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA 13 Préparation de la solution d’ARN Pour la manipulation de solutions d’ARN, toujours suivre les recommandations cidessous : • Décongeler les solutions mères d’ARN et les conserver sur de la glace. • Toujours ouvrir les solutions mères d’ARN dans l’ESB. • Répartir les solutions mères d’ARN en parts aliquotes dans différents récipients pour ne pas avoir à réaliser plusieurs cycles de décongélation-congélation. • Ne pas agiter les solutions d’ARN avec un agitateur vortex. • Avant utilisation, les mélanger délicatement par inversion et pipetage. • Utiliser des cônes de pipette sans RNase pour mesurer et transférer les solutions d’ARN. Suivre les étapes ci-dessous pour préparer la solution d’ARN. Pour maintenir l’état stérile des réactifs, effectuer toutes les étapes utilisant des tubes ouverts à l'intérieur de l’ESB. 14 Étape Action 1 Récupérer une part aliquote d’ARN congelée, puis la décongeler sur de la glace. Toujours conserver l’ARN sur de la glace afin d’empêcher sa dégradation. 2 Une fois décongelée, mesurer la concentration de la solution mère d’ARN par UV-Vis. 3 Saisir la concentration mesurée de la solution mère d’ARN dans l’étape 1 de la Feuille de calcul. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Étape Action 4 À l'aide d'une pipette, prélever les volumes de tampon de formulation (1) et d’eau de qualité biologie moléculaire (2) (indiqués à l’étape 6 de la Feuille de calcul) dans un tube destiné à la solution d’ARN. 1 2 3 5 Ajouter le volume requis d’ARN (3) dans le tube de solution d’ARN, comme indiqué à l’étape 6 de la Feuille de calcul. 6 Prélever l'échantillon avec précaution à l'aide d'une pipette, le verser, puis mélanger. Conserver la solution mère d’ARN sur de la glace jusqu’à utilisation. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA 15 Formulation de NPL-ARN Suivre les étapes ci-dessous pour formuler les NPL-ARN sur l’instrument Ignite ou Ignite +. Étape Action 1 Mettre l’instrument en marche comme décrit dans le Mode d’emploi. 2 Nettoyer l’instrument avec une solution de décontamination des RNases puis avec de l’isopropanol à 70 %. 3 Dans le menu principal, appuyer sur Quick Run (Cycle rapide). 4 Sélectionner les seringues à utiliser pour les solutions L, C et R en se basant sur les volumes calculés nécessaires pour chaque solution, indiqués en gris à l’étape 7 dans la Feuille de calcul. Remarque : Il est recommandé d’utiliser la plus petite taille de seringue pouvant recueillir les volumes calculés. 5 Sur l’interface utilisateur de l’instrument, saisir les paramètres du cycle indiqués dans les cellules oranges de l’étape 7 de la Feuille de calcul. Voir le Mode d’emploi de l’instrument pour plus de détails. 6 Insérer la cartouche dans l’instrument. 7 Préparer la seringue R avec le mélange de lipides : a. Agiter la solution de mélange de lipides à l'aide d’un agitateur vortex. 16 Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Étape Action b. Aspirer la quantité de mélange de lipides requise dans la seringue en utilisant une aiguille émoussée propre. Remarque : Il est recommandé de prélever 100 à 200 µl de mélange supplémentaires dans les seringues pour garantir que le volume complet est administré dans la cartouche. Astuce : Pour éviter les bulles d’air, suivre les étapes décrites ci-dessous. i. Aspirer 0,2 à 0,3 ml dans la seringue, hors aiguille. ii. Éliminer les éventuelles bulles d'air près du joint d’étanchéité en caoutchouc en tapotant sur la seringue. iii. Avec précaution, évacuer l'air présent dans la seringue jusqu’à ce qu'une goutte apparaisse au bout de l'aiguille. iv. Aspirer le reste de solution dans la seringue, hors aiguille. c. Retirer l’aiguille de la seringue. d. À l’aide du piston, pousser le liquide dans la seringue en évitant tout écoulement au niveau de la pointe de la seringue. e. Vérifier que le volume requis plus un faible volume supplémentaire sont présents dans la seringue R. 8 À partir du tube de solution d’ARN, aspirer la totalité de la solution dans la seringue C en suivant la procédure décrite ci-dessus pour la seringue R. Remarque : Ne pas agiter la solution d’ARN sur un agitateur vortex, mais utiliser plutôt une pipette pour aspirer/verser la solution avec précaution afin de la mélanger. 9 Si la procédure inclut une dilution en ligne, prélever le tampon de dilution 1X dans la seringue L en suivant la procédure décrite ci-dessus pour la seringue R. 10 Poursuivre et fixer les seringues R, C et L (si nécessaire), puis commencer la procédure de formulation sur l’instrument comme indiqué dans le Mode d’emploi de ce dernier. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA 17 Traitement en aval des NPL Suivre les étapes ci-dessous après avoir terminé l’étape de formulation sur l’instrument. Étape Action 1 Diluer les NPL-ARN avec le volume de tampon de dilution 1X de l'étape 8 de la Feuille de calcul, afin d’obtenir une dilution totale par 10. Remarque : Par exemple, si une dilution en ligne de 2:1 a été effectuée (dilution en ligne par 3), la feuille de calcul calcule le volume de sorte qu'une dilution manuelle par 3,33 avec le tampon de dilution 1X soit ensuite effectuée. 2 Conserver les NPL-ARN diluées sur de la glace jusqu’à la filtration centrifuge. 3 Remplir les filtres pour centrifugation de NPL-ARN diluées. 4 Centrifuger à 2000 x g pendant 20 minutes à 4 °C dans un rotor à godets oscillants. Remarque : L’utilisation de vitesses plus élevées permet de réduire le temps de traitement. Toutefois, les structures d’ARN plus longues et plus complexes doivent être manipulées avec précaution. La vitesse maximale recommandée est de 4000 x g. 18 5 Jeter la solution se trouvant en dessous de l’unité de filtration et répéter l’étape 3 et l’étape 4 si nécessaire, jusqu’à ce que la totalité de l’échantillon soit reconcentrée et atteigne approximativement le volume de NPL-ARN de départ. 6 Effectuer une dilution par 5 avec le tampon de dilution 1X dans le filtre de centrifugation et reconcentrer l'échantillon jusqu’à atteindre le volume de NPL-ARN de départ. 7 Jeter la solution se trouvant en dessous de l'unité de filtration. 8 Répéter l’étape 6 et l’étape 7 . Lors de la reconcentration, viser un volume équivalant à la moitié du volume de NPL-ARN souhaité. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Étape Action 9 Récupérer l'échantillon dans le filtre à l'aide d’une micropipette, puis le transférer dans le tube de l’échantillon concentré . Remarque : Il est recommandé de placer la pipette sur la membrane pour une meilleure récupération de l'échantillon. 10 Facultatif : laver la membrane du filtre avec environ 100 à 200 µl de tampon de dilution 1X pour augmenter la récupération des NPL-ARN. 11 Mesurer le volume de NPL-ARN récupéré du filtre pour centrifugation, y compris le volume de lavage. Saisir cette valeur à l’étape 8 de la Feuille de calcul (1). 1 2 La feuille de calcul calcule la concentration théorique de l'échantillon de NPLARN final après la dilution avec le tampon de cryoconservation et la filtration stérile (2). 12 Prélever avec une pipette des volumes identiques d’échantillon et de tampon de cryoconservation 2X, et les verser dans le tube de tampon de cryoconservation. 13 Avec la pipette, aspirer/verser l'échantillon au moins cinq fois afin de mélanger les NPL et le tampon. 14 Dans l’ESB, filtrer l'échantillon de cryoconservation en plaçant un filtre stérile de 0,2 µm dans le tube stérile de l’échantillon stérile. Astuce : Pour maximiser la récupération des NPL, introduire de l’air dans le filtre à deux ou trois reprises pour garantir la collecte de tous les résidus de NPL. 15 Prélever une part aliquote de NPL-ARN pour obtenir le volume requis et la verser dans le tube d’échantillon à analyser. 16 Stocker le tube d’échantillon stérile dans un environnement réfrigéré en attendant les résultats de l'analyse physicochimique. 17 Mesurer la taille des particules par diffusion dynamique de la lumière (DLS). Si nécessaire, contacter Cytiva pour obtenir un protocole de mesure détaillé. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA 19 20 Étape Action 18 Déterminer la concentration en ARN des NPL à l’aide de l’essai RiboGreen. Voir le document RiboGreen Assay Protocol to Determine RNA Encapsulation Efficiency, disponible sur Internet, pour obtenir des instructions détaillées. Voir la section Ressources en ligne pour l’utilisateur, à la page 2. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Dilution à la concentration voulue Exécuter les étapes suivantes dans l’ESB pour maintenir le ou les échantillons de NPLARN stériles. Étape Action 1 Diluer les NPL-ARN à la concentration voulue avec le tampon de cryoconservation 1X. Remarque : S'appuyer sur les résultats de l’essai RiboGreen pour déterminer les volumes nécessaires pour atteindre cette concentration. 2 Pour mélanger minutieusement ces volumes, les aspirer/verser à l'aide d’une pipette à cinq reprises minimum. 3 Répartir l'échantillon en parts aliquotes dans plusieurs tubes pour limiter le nombre de cycles de congélation-décongélation des NPL-ARN. Remarque : Il est recommandé de soumettre les NPL-ARN à un cycle de congélationdécongélation maximum. Les NPL-ARN sont désormais prêtes à être utilisées. Pour un stockage de courte durée, conserver l’échantillon à 4 °C et l’utiliser dans un délai d’une (1) semaine maximum. Pour un stockage de longue durée (9 mois maximum), conserver les échantillons à -80 °C. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA 21 Recherche des informations de commande sur Internet Les informations les plus récentes sur les produits proposés et les codes des produits sont disponibles sur Internet. Suivre les étapes ci-dessous pour rechercher des systèmes de formulation de nanoparticules lipidiques, des réactifs, des cartouches ou d’autres accessoires. 22 Étape Action 1 Accéder au site cytiva.com. 2 Effectuer une recherche par nom de produit ou catégorie de produit. 3 Naviguer jusqu'à la page du produit recherché. 4 Faire défiler jusqu’à la section Product Specifications (Caractéristiques des produits), qui indique les noms des produits, les codes des produits et d’autres informations de commande. Cytiva RNA delivery LNP kit, 3 ml et 6 ml Mode d’emploi 29798795 AA Page laissée intentionnellement vide cytiva.com Cytiva et le logo Drop sont des marques de commercede Life Sciences IP Holdings Corporation ou de l'une de ses sociétés affiliées opérant sous le nom de Cytiva. Ignite, Ignite+, NanoAssemblr et NxGen sont des marques de commerce de Global Life Sciences Solutions USA LLC ou de l’une de ses sociétés affiliées opérant sous le nom de Cytiva.. Amicon est une marque de commerce de Merck KGaA. Triton est une marque de commerce de Union Carbide Corporation. RiboGreen et Quant-iT sont des marques de commerce de Thermo Fisher Scientific. Toute autre marque de commerce tierce est la propriété de son détenteur respectif. © 2024 Cytiva Pour les coordonnées des bureaux locaux, visiter le site cytiva.com/contact 29798795 AA V:3 07/2024 ">
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